Question

【題目】馬鈴薯是表達外源蛋白的理想受體材料。某科研小組通過農桿菌轉化法獲得高產重組人血清白蛋白（rHSA)的轉基因馬鈴薯，下圖是該小組構建的基因表達載體中T-DNA示意圖。請回答：

（1）天然農桿菌Ti質粒的T-DNA上具有tms和tmr基因（分別控制合成植物生長素和細胞分裂素），在人工改造質粒時應使用________切除這兩個基因，以防止____________________。

（2）構建基因表達載體時，在rHSA基因兩端分別加上限制酶KpnⅠ和SalⅠ的識別序列（兩種酶切割產生不同的黏性末端)，從基因表達角度分析其目的是____________。科研小組PCR擴增rHSA基因時，其中一種引物堿基序列為：5＇-CGGGGTACCGCCACCATGGATGCACACAAG-3＇，該序列含有KpnⅠ識別序列和增強表達的序列5＇-GCCACC-3＇，則限制酶KpnⅠ的識別序列是_______________。

（3）將基因表達載體轉入處于___________的農桿菌細胞中。用農桿菌轉化液與馬鈴薯愈傷組織共培養一段時間后，為了得到已轉化且不含農桿菌的愈傷組織，將感染后的愈傷組織轉移至含有潮霉素和羧芐青霉素的培養基中培養，加潮霉素的目的是_______________，加羧芐青霉素的目的是____________。

Answer 1

【答案】 限制酶 tms和tmr基因的表達產物影響受體植物內源激素的含量 rHSA基因能正向接入其啟動子與終止子之間，保證rHSA基因能準確表達 或 5’-GGTACC-3’ 感受態 篩選出含潮霉素抗性基因的愈傷組織 除去含有潮霉素抗性基因的農桿菌

【解析】試題分析：本題結合轉基因馬鈴薯的形成過程，考查基因工程的相關知識，意在考查學生分析題圖獲取有效信息的能力，以及理解所學知識要點，把握知識間聯系的能力。學生可根據題圖和題干的提示、要求，梳理相關知識點，對各小題進行分析作答，同時需要學生掌握基因工程的原理、操作步驟及其一些細節問題。

（1）由于天然農桿菌Ti質粒的T-DNA上具有tms和tmr基因（分別控制合成植物生長素和細胞分裂素），這兩種基因表達可使植物合成植物生長素和細胞分裂素，進而影響了植物體內內源激素的含量，因此需要用限制性核酸內切酶切除tms和tmr基因。

（2）據圖可知，加上的兩種限制酶的識別序列在啟動子與終止子之間，因此加上兩種限制酶的識別序列后rHSA基因能正向接入其啟動子與終止子之間，保證rHSA基因能準確表達。由于引物系列中含有KpnⅠ識別序列和增強表達的序列，KpnⅠ識別序列應該在增強表達序列5＇-GCCACC-3＇之前，即5’-GGTACC-3’。

（3）將將基因表達載體導入農桿菌時，首先必須用Ca2+處理土壤農桿菌，使土壤農桿菌轉變為感受態，以便于導入基因表達載體。將感染后的愈傷組織轉移至含有潮霉素和羧芐青霉素的培養基中培養，加潮霉素的目的是篩選出含潮霉素抗性基因的愈傷組織，由于篩選的是愈傷組織，需要把含有潮霉素抗性基因的農桿菌除去，因此加入羧芐青霉素的目的是除去含有潮霉素抗性基因的農桿菌。