Question

【題目】生物興趣小組試圖探究牛和山羊的瘤胃中的微生物對尿素是否有分解作用，設計了以下實驗，并成功篩選到能降解尿素的細菌（目的菌）。培養基成分如表所示，實驗步驟如圖所示。請分析回答問題：

KH2PO4 Na2HP04 MgS047H20	1.4g 2.1g 0.2g
葡萄糖	10g
尿素	1g
瓊脂	15g
溶解后自來水定容到1000mL

（1）分解尿素的細菌能分泌____________酶，能將尿素分解成_______________。培養基中加入尿素的目的是________________。

（2）培養基中為“目的菌”生長提供氮源和碳源的物質分別來自__________和________。實驗需要振蕩培養，原因是______________。轉為固體培養時，常采用___________法接種，獲得單菌落后繼續篩選。

（3）在實驗過程中：①培養基、培養皿；②玻璃棒、試管、錐形瓶、吸管；③瘤胃中液體。其中需要滅菌的是_____________(填序號）。

（4）分離分解尿素的細菌實驗時，甲同學從培養基上篩選出大約150個菌落，而其他同學只選擇出大約50個菌落。甲同學實驗結果差異的原因可能有__________(填序號）。

①取樣不同 ②培養基污染 ③操作失誤 ④沒有設置對照

（5）以尿素為唯一氮源的培養“目的菌”后，加入________指標劑后變紅，說明“目的菌”能分解尿素。

（6）為進一步確定取自瘤胃中液體的適當稀釋倍數，將接種的培養皿放置在37℃恒溫培養箱中培養2448h，觀察并統計具有紅色環帶的菌落數，結果見表，其中___________倍的稀釋比較合適。

稀釋倍數	103	104	105	106	107
菌落數	>500	367	248	36	18

Answer 1

【答案】 脲酶 氨 篩選目的菌 尿素 葡萄糖 為目的菌提供氧氣 稀釋涂布平板 ①和② ①②③ 酚紅 106或105

【解析】試題分析：本題是對用于微生物培養的培養基的配方及營養成分、選擇培養基的選擇作用、常用的接種方法、無菌操作技術、對分解尿素的菌的鑒定等相關知識的綜合性考查，回憶微生物培養的培養基的配方和營養成分、選擇培養基的選擇作用、常用的接種方法的具體操作和目的、無菌操作技術、對分解尿素菌的鑒定等知識點，然后結合問題進行解答。

（1）分解尿素的細菌能分泌脲酶，能將尿素分解成氨。該實驗的目的是篩選到能高效降解尿素的細菌（目的菌），在培養基中加入尿素后，能高效降解尿素的細菌（目的菌）能夠生長繁殖，不能分解尿素的細菌無法生長繁殖。

（2）目的菌生長繁殖需要的氮源來自尿素，碳源來自葡萄糖；由于分解尿素的菌是需氧微生物，因此需要震蕩培養，為目的菌提供氧氣。轉為固體培養時，常采用稀釋涂布平板法接種，獲得單菌落后繼續篩選。

（3）為了保證培養物不被污染，對培養細菌用的培養基與培養皿和玻璃棒、試管、錐形瓶和吸管要進行滅菌，瘤胃中液體要進行消毒。

（4））由題意知，該同學與其他同學獲得的菌落數差異很大，可能的原因是取樣不同，培養基被污染；或者是實驗過程中操作失誤。

（5）尿素被分解尿素的細菌分解為氨，氨會使培養基堿性增強，pH升高，指示劑酚紅變紅，因此在培養基中加入酚紅指示劑，檢測培養基pH的變化來判斷尿素是否被分解。

（6）觀察并統計菌落數應選30-300之間的培養皿進行統計，故應選106或105倍的稀釋比較合適。