Question

【題目】【生物——選修1:生物技術實踐】某興趣小組采用稀釋涂布平板法對牛奶樣品中的微生物進行計數，步驟如下。回答下列問題:

（1）梯度稀釋：每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是____________。

（2）涂布平板：取O.lmL稀釋液，選用下圖中的____________均勻地涂布在牛肉膏蛋白腺固體培養基表面，每個濃度下涂布三個平板。為避免雜菌污染，接種應在_____________________附近進行。可用____________的培養基作為空白對照以檢驗培養基配制是否達標。

（3）培養與計數：將上述平板放入恒溫培養箱中培養，每隔12小時統計一次菌落數，取菌落數穩定時的記錄作為結果，防止______________。在104、105、106倍稀釋時的統計結果記錄如下表：

計算得每毫升牛奶樣品中細菌數大約是___________個。這種方法統計的活菌數往往比實際數目低，原因是___________。除此以外，___________也是測定微生物數量的常用方法，此方法需要使用血細胞計數板。

Answer 1

【答案】 使微生物和無菌水混合均勻 B （酒精燈）火焰 未接種 因培養時間不足而導致遺漏菌落的數目 5×l07 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落 顯微鏡直接計數

【解析】試題分析：本題考查微生物的計數的有關知識，意在考查考生對知識的識記、理解和運用能力。

（1）每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是使微生物和無菌水混合均勻。

（2）稀釋涂布平板法在涂布平板是需要用到涂布器。圖中B是涂布器，所以用C滴管取O.lmL稀釋液后，需要選擇B涂布器均勻地涂布在牛肉膏蛋白腺固體培養基表面。為避免雜菌污染，接種應在（酒精燈）火焰附近進行。為檢驗培養基配制是否達標要用未接種的培養基作為空白對照。

（3）統計菌落數量時，應取菌落數穩定時的記錄作為結果，防止因培養時間不足而導致遺漏菌落的數目。一般選擇菌落數在30-300的平板進行計數，因此要選擇稀釋倍數為倍且培養時間為48h的統計結果進行計數，每毫升牛奶樣品中細菌數大約是×=5×個。這種方法統計的活菌數往往比實際數目低，原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。除此以外，顯微鏡直接計數也是測定微生物數量的常用方法，此方法需要使用血細胞計數板。

項目	條件	結果	常用方法	應用范圍
消 毒	較為溫和的物理或化學方法	僅殺死物體表面或內部的部分對人體有害的微生物	煮沸消毒法	日常用品
			巴氏消毒法	不耐高溫的液體
			化學藥劑消毒法	用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源
滅 菌	強烈的理化因素	殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子	灼燒滅菌法	接種工具
			干熱滅菌法	玻璃器皿、 金屬工具
			高壓蒸汽 滅菌法	培養基及容 器的滅菌