Question

【題目】土壤農桿菌能將自身Ti質粒的T-DNA整合到植物染色體DNA上，誘發植物形成腫瘤。T-DNA中含有植物生長素合成酶基因（S）和細胞分裂素合成酶基因（R），如圖1所示，它們的表達與否能影響相應植物激素的含量，進而調節腫瘤組織的生長與分化。基因工程常用Ti質粒作為運載體，圖2表示抗蟲棉培育中使用的三種限制酶A、B、C的識別序列以及Ti質粒上限制酶切割位點的分布，抗蟲基因內部不含切割位點，兩側標明序列為切割區域。請分析回答下列問題：

（1）酶C切割DNA后形成的黏性末端是__________。

（2）據圖2分析，切取抗蟲基因時，使用限制酶______，切割Ti質粒時，使用限制酶________。

（3）為了獲得重組質粒，將切割后的質粒與目的基因片段混合并加入________酶。成功構建的重組質粒中含有限制酶A的識別位點__________個，若用酶C處理該重組質粒，將得到________個DNA片段。

（4）若抗蟲基因插入的位置在R基因內部，篩選出________植株即是成功導入抗蟲基因的棉花植株。

Answer 1

【答案】AATT— 酶B和酶C 酶A和酶B DNA連接酶 0 2 生根瘤

【解析】

由圖1可知，基因S不表達，基因R表達，細胞分裂素與生長素比值升高，誘發了生芽瘤；分析圖2可知，在目的基因的左側只有B酶的識別位點，右側只有C酶的識別位點；質粒上含有三種酶的識別位點，其中T-DNA上含有酶A和酶B的識別位點，因此應選用酶B和酶C切取目的基因，選用酶A和酶B切割Ti質粒。

（1）酶C切割DNA后形成的黏性末端是AATT—。

（2）據圖2分析，抗蟲基因含有酶B和酶C的識別序列，所以切取目的基因應使用限制酶B和酶C；T-DNA含有酶A和酶B的識別位點，所以切割Ti質粒時，使用限制酶A和酶B。

（3）為了獲得重組質粒，將切割后的質粒與目的基因片段混合并加入DNA連接酶。酶A和酶C切割形成的黏性末端的序列相同，使用酶B和酶C切取抗蟲基因，使用酶A和酶B切割Ti質粒，再用DNA連接酶連接兩者形成重組質粒后，重組質粒不含酶A的識別位點，，故成功構建的重組質粒中含有限制酶A的識別位點0個，成功建構的重組質粒含有兩個酶C的識別位點，因此用酶C處理重組質粒將得到2個DNA片段。

（4）若抗蟲基因插入的位置在R基因內部，則R基因結構被破壞，失去原有的功能，即R基因不表達，但S基因正常表達，所以根據圖1可知篩選出生根瘤植株即是成功導入抗蟲基因的棉花植株。