Question

【題目】硝基苯酚是工業污水中重要污染物，某同學欲從污水處理廠污泥中分離分解硝基苯酚的細菌。請回答下列有關問題：

（1）為了篩選污泥中可分解硝基苯酚的細菌，在配制培養基時應選擇________（硝基苯酚，硝基苯酚+牛肉膏，硝基苯酚+葡萄糖）作為碳源，不采用其他兩組的原因是________________________________。

（2）純化菌株時劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落。分析造成第二劃線區域的第一條線無菌落的可能原因是________（答一點即可）。

（3）進行梯度稀釋時的一般操作是________________；常用稀釋涂布平板法進行活菌計數，其原理是________________，但統計的菌落數往往少于稀釋液中的活菌數，原因是________________。

Answer 1

【答案】硝基苯酚 其他兩組分別含有其他碳源，不能保證硝基苯酚是唯一碳源 接種環灼燒后未冷卻劃線（未從第一區域末端開始) 將1mL菌液移入盛有9mL的無菌水中 培養基表面的一個菌落來源于一個活菌 兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察到的只是一個菌落

【解析】

微生物生長繁殖所必需的營養物質主要包括碳源、氮源、水和無機鹽等，根據題意，欲從污水處理廠污泥中分離分解硝基苯酚的細菌，則需配制以硝基苯酚為唯一碳源的培養基；微生物的培養過程中，常用來分離微生物的方法是稀釋涂布平板法和平板劃線分離法。

（1）根據以上分析已知，為了篩選污泥中可分解硝基苯酚的細菌，在配置培養基時應選擇硝基苯酚作為唯一碳源，不采用其他兩組的原因是其他兩組分別含有其他碳源，不能保證硝基苯酚是唯一碳源。

（2）根據題意分析，劃線的某個平板經培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區域的第一條線上無菌落，其它劃線上有菌落，造成劃線無菌落可能的操作失誤有：接種環灼燒后未冷卻，將菌燙死了；也可能是因為劃線未從第一區域末端開始。

（3）進行梯度稀釋時的一般操作是將1mL菌液移入盛有9mL的無菌水中；常用稀釋涂布平板法進行活菌計數，其原理是培養基表面的一個菌落來源于一個活菌，用于兩個或多個細胞連在一起時平板上觀察到的只是一個菌落，所以該方法統計的菌落數往往少于稀釋液中的活菌數。