Question

【題目】苯酚是工業生產排放的有毒污染物質，自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產生的廢水中含有苯酚，為了降解廢水中的苯酚，研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株。篩選的主要步驟如圖所示，①為土壤樣品。請回答下列問題：

（1）②中培養目的菌株的選擇培養基中應加入_______作為碳源，②中不同濃度碳源的培養基_____（A.影響；B.不影響）細菌的數量，如果要測定②中活細菌數量，常采用_____________法。

（2）④為對照，微生物在④中不生長，在⑤中生長，④與⑤培養基的主要區別在于_____________；使用_____________法可以在⑥上獲得單菌落。采用固體平板培養細菌時平板倒置原因是_____________。

（3）若要比較不同菌株降解苯酚能力，簡要的思路是__________________________。

（4）實驗過程中如何防止其它微生物的污染？_____________。（至少達答兩點）

Answer 1

【答案】 苯酚 A 平板菌落計數(活菌計數或菌落計數) ④的培養基沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養基加入苯酚作為碳源 平板分離(稀釋涂布平板或平板劃線分離) 避免培養過程產生的水分影響微生物的生長 用同樣苯酚濃度的培養液培養不同菌株，一定時間后，測定培養液中苯酚含量 培養基滅菌，接種環境滅菌，接種過程無菌操作等

【解析】【試題分析】

本題綜合考查微生物的培養及實驗設計和分析能力。從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養、梯度稀釋、涂布培養和篩選菌株。題目中所篩選的細菌“只能”降解苯酚，故可采用以苯酚為唯一碳源的選擇培養基篩選，含除苯酚外其他碳源的培養基作為對照。嚴格滅菌、無菌操作可有效防止實驗過程中的雜菌污染。

（1）②中的選擇培養基中應加入苯酚作為碳源，以增大降解苯酚細菌的濃度；②中不同濃度的碳源影響（A）細菌數量，可用平板菌落計數法來測定②中活菌數目。

（2）④與⑤培養基的主要區別在于④的培養基沒有加入苯酚作為碳源，⑤的培養基中加入苯酚作為碳源；使用釋涂布平板法或平板劃線法可以在⑥上獲得單菌落；采用固體平板培養細菌時要倒置培養，以避免培養過程產生的水分影響微生物的生長。

（3）用同樣苯酚濃度的培養液培養不同菌株，一定時間后，測定培養液中苯酚含量，可比較不同菌株降解苯酚的能力。

（4）實驗過程中要防止其它微生物的污染，應該做到從制備培養基到接種與培養等全部實驗過程都無菌操作，如培養基滅菌、接種環境滅菌、接種過程無菌操作等。