Question

【題目】基因表達載體的構建是基因工程的重要技術。下圖甲表示以大腸桿菌為受體細胞的基因表達載體的構建過程，請回答以下問題：

（1）質粒中的復制原點是________________酶識別和結合的位點。

（2）為了篩選獲得含有上圖所示重組質粒的大腸桿菌，實驗人員首先將經轉化處理過的大腸桿菌接種在含_____________（抗生素）的培養基中，并出現菌落（圖乙），然后用滅菌后的絲絨包上棉花制成的一枚“印章”，將圖乙所示培養基上的菌落印到含__________（抗生素）的另一培養基上，培養后形成菌落（圖丙）。圖丙中，________（填“能正常生長繁殖”或“不能正常生長繁殖”）的菌落已導入含目的基因的重組質粒。

（3）基因工程中，某些噬菌體經改造后可以作為載體。噬菌體載體與質粒載體相比,其優點是___________________________________。

（4）1967年，羅思和海林斯基發現細菌擬核DNA之外的質粒有自我復制能力，并可以在細菌細胞之間轉移，這一發現對于當時基因工程技術的發展有什么促進作用？___________。

（5）若某DNA分子片段用兩種限制酶酶切成不同長度的片段（結果如下表所示）。

酶	酶切結果（1kb=1000對堿基）
BamHI	四個片段：8.0kb，7.5kb，4.5kb，2.9kb
BglII	三個片段：13kb，6kb，3.9kb
BamHI+ BglII	六個片段：7.5kb，6kb，3.5kb，2.9kb，2kb，1kb

7.5kb、2.9kb和6kb三個片段中不存在BamHI和BglII兩種酶的酶切位點，請根據上述酶切結果說明判斷依據：_______________。

Answer 1

【答案】 DNA聚合 氨芐青霉素 四環素 不能正常生長繁殖 噬菌體載體能更有效地侵染受體細胞 (噬菌體載體的轉化效率更高) 為基因轉移找到了一種運載工具（質�？梢宰鳛槟康幕�因的運載工具） 7.5kb、2.9kb和6kb三個片段是兩種限制酶單獨酶切時可產生的片段

【解析】（1）質粒的化學本質為環狀DNA，復制時DNA聚合酶識別、結合復制原點，啟動DNA復制過程。

（2）據圖可知，目的基因插入了四環素抗性基因中，破壞了四環素抗性基因，重組質粒上含有氨芐青霉素抗性基因，經轉化處理過的大腸桿菌接種在含氨芐青霉素的圖乙的培養基中，產生的菌落應是含有普通質�；蛑亟M質粒的大腸桿菌形成的。用滅菌后的絲絨包上棉花制成的一枚“印章”，將圖乙所示培養基上的菌落印到含四環素的圖丙培養基中，不能正常生長、繁殖的菌落表明含有重組質粒，能生長的菌落表明含有普通質粒。

（3）噬菌體屬于細菌性病毒，可專性侵染細菌，噬菌體載體與質粒載體相比, 能更有效地侵染受體細胞 (噬菌體載體的轉化效率更高)。

（4）細菌擬核DNA之外的質粒有自我復制能力，并可以在細菌細胞之間轉移，提示可以把質粒作為運載工具，實現目的基因的轉移。

（5）該DNA分子被BamHI酶切后，可產生4個片段，說明該DNA分子上含有三個BamHI的酶切位點，同理可知該DNA分子上含有二個BglII的酶切位點，BamHI和 BglII共同作用，產生的六個片段中，7.5kb、2.9kb和6kb三個片段是兩種限制酶單獨酶切時可產生的片段，據此可知，7.5kb、2.9kb和6kb三個片段中不存在BamHI和BglII兩種酶的酶切位點。