Question

【題目】下表中列出了幾種限制酶識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)，圖l、圖2中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點(diǎn)。請(qǐng)回答下列問題：

（1）一個(gè)圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)Sma Ⅰ切割前、后，分別含有 、 個(gè)游離的磷酸基團(tuán)。

（2）若對(duì)圖中質(zhì)粒進(jìn)行改造，插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越 。

（3）用圖中的質(zhì)粒和外源DNA構(gòu)建重組質(zhì)粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是 。

（4）與只使用EcoR I相比較，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ兩種限制酶同時(shí)處理質(zhì)粒、外源DNA的優(yōu)點(diǎn)在于可以防止 。

（5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入 酶，若兩兩相連，則連接產(chǎn)物中有哪幾種情況? 。

（6）重組質(zhì)粒中抗生素抗性基因的作用是為了 。

（7）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在 的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測(cè)。

Answer 1

【答案】

（1）0、2

（2）高

（3）SmaⅠ會(huì)破壞質(zhì)粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因

（4）質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化

（5）DNA連接

（6）鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞

（7）蔗糖為唯一含碳營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)

【解析】

（1）質(zhì)粒是環(huán)狀DNA分子，不含游離的磷酸基團(tuán)；外源DNA分子的每一條鏈都含有一個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，因此共含有2個(gè)游離的磷酸基團(tuán)．

（2）DNA分子中，C與G之間有三個(gè)氫鍵，A與T之間有兩個(gè)氫鍵，所以C與G含量越多，DNA分子的熱穩(wěn)定性越高．由表中信息可知，SmaⅠ的識(shí)別序列為CCCGGG，酶切位點(diǎn)在C與G之間，因此插入的SmaⅠ酶切位點(diǎn)越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性將越高。

（3）用SmaⅠ酶切割外源DNA和質(zhì)粒時(shí)，會(huì)導(dǎo)致目的基因與抗性基因被破壞，因此不能用SmaⅠ構(gòu)建重組質(zhì)粒。

（4）若只使用EcoR切割目的基因和外源DNA，則除了含目的基因的片段和質(zhì)粒連接外，質(zhì)粒和含目的基因的片段可能會(huì)自身連接而環(huán)化．

（5）將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入DNA連接酶。

（6）重組質(zhì)粒中抗生素基因的作用是鑒別和篩選含有目的基因的細(xì)胞。

（7）為了從cDNA文庫中分離獲取蔗糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入喪失吸收蔗糖能力的大腸桿菌突變體，然后在蔗糖為唯一含碳營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以完成目的基因表達(dá)的初步檢測(cè)。