Question

【題目】下列是基因工程的有關問題，請回答：

(1)限制性核酸內切酶可以識別雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，并可以使每條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的________(填化學鍵名稱)斷裂，形成的末端總體可分為兩種類型，分別是________。

(2)目的基因和運載體重組時需要的工具酶是________，和限制性核酸內切酶相比，它對所重組的DNA兩端堿基序列________(有或無)專一性要求。

(3)圖1表示構建表達載體時的某種質粒與目的基因。已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是－G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的識別序列和切點是—↓GATC－。分析可知，最好選擇限制酶________切割質粒，限制酶________切割目的基因所在的DNA，這樣做的好處分別是________、________。

Answer 1

【答案】磷酸二酯鍵粘性末端和平末端DNA連接酶無酶Ⅰ酶Ⅱ酶Ⅰ切割質粒不會把兩個標記基因都破壞目的基因兩端均有酶Ⅱ的識別序列

【解析】

試題本題考查基因工程的原理及操作步驟，掌握基因工程的操作工具及各工具的作用，再結合所學的知識準確答題。

（1）限制性核酸內切酶（限制酶）能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定的核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開，經限制酶切割產生的DNA片段末端通常有兩種形式。分別為黏性末端和平末端。
（2）目的基因和運載體重組時需要DNA連接酶連接兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵。多種限制酶切割，形成不同的切割位點，所用的DNA連接酶對所連接的DNA兩端堿基序列就沒有專一性要求。
（3）圖1中顯示，已知限制酶Ⅰ的識別序列和切點是-G↓GATCC-，酶Ⅰ切割質粒不會把兩個標記基因都破壞，最好選擇限制酶I切割質粒。限制酶Ⅱ的識別序列和切點是一↓GATC-，目的基因兩端均有酶Ⅱ的識別序列，因此用限制酶II切割目的基因所在的DNA。