Question

【題目】【生物—選修3：現代生物科技專題】Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療。其技術流程如下圖：

（1）步驟①中所選的卵母細胞應處于 期。

（2）步驟②中，重組胚胎培養到囊胚期時，可從其 分離出ES細胞，ES細胞在形態上表現為 的特點。

（3）步驟③中，需要構建含有Rag2基因的 。可以根據Rag2基因的核苷酸序列設計合成 ，利用 技術擴增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分別在目的基因所在DNA片段兩側進行酶切獲得Rag2基因片段。為將該片段直接連接到表達載體，所選擇的表達載體上應具有 酶的酶切位點。

Answer 1

【答案】（1）減數第二次分裂中（MⅡ中）

（2）內細胞團 體積小、細胞核大、核仁明顯

（3）表達載體（重組質粒） 引物 PCR Hind Ⅲ和PstⅠ

【解析】（1）步驟①為核移植，所選的卵母細胞應處于減數第二次分裂中（MⅡ中）。

（2）重組胚胎培養到囊胚期時，可從其內細胞團中分離出ES細胞，ES細胞在形態上表現為體積小、細胞核大、核仁明顯。

（3）步驟③中表示將Rag2基因（目的基因）導入ES細胞（受體細胞），此過程需要構建含有Rag2基因的表達載體（重組質粒）。設計引物要遵循堿基互補配對原則，所以根據Rag2基因的核苷酸序列進行設計。可利用PCR技術擴增Rag2基因片段。Rag2基因片段是用HindⅢ和PstⅠ限制酶切割獲得，所以表達載體上應具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位點。