Question

【題目】根據基因工程的有關知識，回答下列問題：

（1）限制性核酸內切酶切割DNA分子后產生的片段，其末端類型有____________和____________。

（2）質粒運載體用EcoRⅠ切割后產生的片段如下：

為使運載體與目的基因相連，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，還可用另一種限制性核酸內切酶切割，該酶必須具有的特點是____________。

（3）按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即____________DNA連接酶和____________DNA連接酶。

（4）反轉錄作用的產物是____________。若要在體外獲得大量反轉錄產物，常采用____________技術。

（5）若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，原因是________________________。

Answer 1

【答案】 黏性末端 平末端 切割產生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產生的相同 大腸桿菌 T4 cDNA(或DNA) PCR 未處理的大腸桿菌吸收質粒(外源DNA)的能力極弱

【解析】試題分析：本題以圖文結合的形式綜合考查學生對基因工程的知識的識記和理解能力。解答本題需熟記并理解DNA重組技術的基本工具、基因工程的基本操作程序并形成清晰的知識網絡。在此基礎上，結合問題情境，從題意中提取有效信息進行相關問題的解答。

(1)限制性核酸內切酶（簡稱限制酶）切割DNA分子后，產生的片段末端類型有黏性末端和平末端。

(2)目的基因與運載體具有相同的黏性末端才能連接，若用包括EcoRⅠ在內的兩種限制酶切割目的基因，則另一種限制酶必須具有的特點是：切割產生的DNA片段末端與EcoRⅠ切割產生的相同。

(3)按其來源不同，基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類，即大腸桿菌DNA連接酶和T4 DNA連接酶。

(4)反轉錄的實質是以mRNA為模板合成DNA的過程，因此反轉錄作用的產物是cDNA(或DNA)。得到DNA可在體外，采用PCR技術進行大量擴增。

(5)由于未處理的大腸桿菌吸收質粒(外源DNA)的能力極弱，因此若用重組質粒轉化大腸桿菌，一般情況下，不能直接用未處理的大腸桿菌作為受體細胞，而通常用Ca2+處理大腸桿菌細胞，使其成為感受態細胞，此時細胞壁和細胞膜的通透性增大，容易吸收重組質粒。