Question

【題目】如圖1表示某質粒，該質粒含有抗氨芐青霉素抗性基因（amp＇）和LacZ基因，LacZ基因能合成β-半乳糖苷酶，該酶能將白色底物X-Gal轉化為藍色產物，圖2表示含目的基因的DNA片段，實驗小組利用該質粒為載體將目的基因導入大腸桿菌，并篩選成功導入重組質粒的受體細胞（ScaⅠ、ApaⅠ、EcoRⅠ表示限制酶切割位點）。請回答下列問題：

（1）構建基因表達載體的目的是_________。在構建基因表達載體時應選用的限制酶是__________。

（2）將重組質粒導入大腸桿菌時，應用__________處理大腸桿菌，制備感受態細胞，實驗室選用微生物作為受體細胞的優點是_________。

（3）重組質粒導入大腸桿菌后，應將大腸桿菌置于以X-Gal為底物，并添加_______________的培養基上培養，挑選出__________（填“白色”或“藍色”）菌落。

（4）檢測目的基因是否成功導入受體細胞常用的方法是__________，該方法依據的原理是__________。

Answer 1

【答案】（1）使目的基因在受體細胞中穩定的復制并表達 ApaⅠ和EcoRⅠ

（2）CaCl2繁殖速度快、多為單細胞、遺傳物質相對較少

（3）氨芐青霉素 白色

（4）DNA分子雜交技術 堿基互補配對

【解析】（1）基因表達載體的構建使目的基因在受體細胞中穩定存在，并且可以遺傳至下一代，使目的基因能夠表達和發揮作用。由分析可知，ScaⅠ會破壞抗氨芐青霉素抗性基因，所以不能用限制酶ScaⅠ，而且要保證目的基因和質粒定向連接，所以不能形成相同的黏性末端，故另一種酶選EcoRI酶，故選ApaⅠ和EcoRⅠ。

（2）將目的基因導入微生物細胞，常用CaCl2處理，使之成為感受態細胞。實驗室選用微生物作為受體細胞的優點是繁殖速度快、多為單細胞、遺傳物質相對較少。

（3）含有目的基因的質粒能產生抗氨芐青霉素，因此可以在培養基中加氨芐青霉素篩選，由于該重組質粒的LacZ基因被破壞，不能合成β-半乳糖苷酶，不能將白色底物X-Gal轉化為藍色產物，因此挑選出白色菌落。

（4）檢測轉基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術，依據的原理是堿基互補配對。