Question

【題目】【加試題】下列文題有關大腸桿菌的培養實驗，請回答：

（1）配制培養大腸桿菌的培養基時，根據“細菌喜葷，霉菌喜素”的規律，通常在培養基中加入蛋白胨和

作為營養物質，為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的 。

（2）大腸桿菌培養和分離的實驗中，在 中進行擴大培養，培養液經 后，在LB固體培養基上進行 ，并將培養皿 放在恒溫培養箱中培養，可以獲得如圖效果。 為了檢測接種、培養過程是否受雜菌污染以及 ，應同時將未接種的培養基放入恒溫培養箱培養。

（3）通常對獲得的純菌種可以依據 的形狀、大小等特征進行初步的鑒定。

（4）關于“大腸桿菌培養和分離”的操作中，下列敘述正確的是（ ）

A．高壓滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋

B．倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養基濺到皿蓋上

C．為了防止污染，接種工具精火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落

D．用記號筆標記培養皿中菌落時，應標記在皿底上

（5）科學家利用轉基因技術，利用大腸桿菌生產胰島素，其過程如下圖。由甲和載體乙拼接形成的丙通常稱為 ，構建得到丙時必需的工具酶有 。在此過程中，用來處理丁以增加細胞壁通透性的化學試劑是（ ）

A．氯化鈉 B．氯化鈣 C．次氯酸鈉 D．纖維素酶

Answer 1

【答案】（14分，除說明外，每空1分）

（1）酵母提取物 NaCl

（2）LB液體培養基 稀釋 涂布分離 倒置 無菌操作是否規范

（3）菌落 （4）D（2分） （5）重組質粒 限制性核酸內切酶和DNA連接酶 B （2分）

【解析】

試題分析：（1）由題意“細菌喜葷”可知：該大腸桿菌為異養細菌，需要的有機營養物質應取自動物性營養，因此配制培養大腸桿菌的培養基時，通常在培養基中加入蛋白胨和酵母提取物等作為營養物質；為維持一定的滲透壓，常需加入一定量的NaCl。

（2）大腸桿菌培養和分離的實驗中，在LB液體培養基中進行擴大培養，培養液經稀釋后，在LB固體培養基上進行涂布分離，并將培養皿倒置放在恒溫培養箱中培養，可以獲得右圖效果。為了檢測接種、培養過程是否受雜菌污染以及無菌操作是否規范，應同時將未接種的培養基放入恒溫培養箱培養。

（3）固體培養基上生長的微生物能形成菌落，菌落的形狀、大小、顏色、軟硬等特征可用于菌種的鑒定。

（4）高壓滅菌加熱結束時，切斷熱源，讓滅菌鍋內溫度自然下降，當壓力表的壓力降到零時，打開放氣閥。旋松螺栓，開啟鍋蓋，A項錯誤；倒平板時，左手將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養基導入培養皿，左手立即蓋上培養皿的皿蓋，B項錯誤；為了防止污染，接種工具精火焰滅菌后應在火焰旁冷卻后挑取菌落，C項錯誤；用記號筆標記培養皿中菌落時，應標記在皿底上，D項正確。

（5）圖中的甲為目的基因，載體乙通常為質粒，因此甲和載體乙拼接形成的丙通常為重組質粒；構建得到重組質粒時必需的工具酶有限制性核酸內切酶和DNA連接酶。丁即大腸桿菌為轉基因技術中的受體細胞，為了增加其細胞壁的通透性，用于處理的化學試劑是氯化鈣，即B選項。