Question

【題目】I、尿素是一種高濃度氮肥用長期施用沒有不良影響，但尿素只有通過土壤中某些細菌分解為氨后，才能被植物吸收利用，分解尿素的細菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解。某同學要分離土壤中能分解尿素的細菌，并統計每克土壤樣品中活菌數目，培養基配方如下：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO47H2O	蛋白胨	葡萄糖	尿素	瓊脂
1.4g	2.1g	0.2g	1.0g	10.0g	1.0g	15.0g

（1）根鋸培養基的成分判斷，該同學能否分離出土壤中分解尿素的細菌_____（能/不能），原因是________________________，不能選擇出只分解以尿素為氮源的微生物。

（2）要統計每克土壤樣品中活菌數目，宜采用__________法接種。

（3）接種前要對培養基進行___________。在整個微生物的分離和培養中，一定要注意在_______條件下進行。

（4）一同學在純化土壤中的細菌時，發現培養基上的菌落連成一片，最可能的原因是_____，應當怎樣操作才可避免此種現象？_______________________。

II、下列是生物學技術制備抗體的兩個途徑模式簡圖。請據圖回答下列問題：

（1）過程①至②所獲取的抗體1 稱為___________，其中過程①是指細胞工程中的____________技術。

（2）④過程需要__________酶，⑤過程則需要的工具酶為___________________。

（3）②處需要篩選，其培養基稱為_____________ （液體培養基/選擇培養基/鑒別培養基）。

（4）如果想用棉花產生該種抗體，則⑥過程的受體細胞通常選用__________菌，經過篩選后再侵染棉花體細胞，轉化成功后通過______________技術獲得能產抗體的轉基因棉花植株。

Answer 1

【答案】不能 培養基含蛋白胨，尿素不是唯一氮源 稀釋涂布平板 滅菌 無菌 菌液濃度過高 對菌液進行梯度稀釋（加大稀釋倍數） 單克隆抗體 細胞融合 逆轉錄 限制酶和DNA 連接酶 選擇培養基 農桿 植物組織培養

【解析】

分解尿素的細菌都能合成脲酶，因此可以選用以尿素為唯一氮源的培養基來分離細菌，并且用瓊脂糖來代替瓊脂作為微生物培養基的固化劑，由于分解尿素的細菌都能合成脲酶，脲酶能催化尿素水解，因此在以尿素為唯一氮源的培養基上，分解尿素的菌能以尿素為氮源生長，而不能分解尿素的菌因缺乏氮源而無法生長。常用的接種微生物的方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液涂布到固體培養基上進行培養，在稀釋度足夠高的菌液里，將聚集在一起的微生物分散成單個細胞，獲得由單個細胞繁殖而來的菌落，稀釋涂布法常用來統計樣品中活菌的數目。據題Ⅱ圖分析，細胞A表示效應B細胞，細胞Y表示雜交瘤細胞，結構甲表示基因表達載體，①過程表示動物細胞融合，②過程表示雜交瘤細胞的培養，③過程表示提取mRNA，④過程表示逆轉錄，⑤表示基因表達載體的構建，⑥表示導入受體細胞。

I、（1）尿素分解菌所需要的氮源是尿素，根鋸培養基的成分判斷，表中的蛋白胨可以為微生物的生存提供氮源，尿素不是唯一氮源，所以不能選擇出只分解以尿素為氮源的微生物。

（2）固體培養基上的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法，稀釋涂布平板法適用于微生物的統計計數。

（3）接種前要對培養基進行滅菌，在整個微生物的分離和培養中，一定要注意在無菌條件下進行。

（4）一同學在純化土壤中的細菌時，發現培養基上的菌落連成一片，最可能的原因是菌液濃度過高，為避免此種現象，應對菌液進行梯度稀釋。

II、（1）過程①至②所獲取的抗體1稱為單克隆抗體，其中過程①是指細胞工程中的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合技術。

（2）④是由mRNA形成DNA的過程，表示逆轉錄，需要逆轉錄酶；⑤過程為基因表達載體的構建，需要的工具酶為限制酶和DNA連接酶。

（3）②過程表示雜交瘤細胞的培養，需要篩選，其培養基稱為選擇培養基。

（4）如果想用棉花產生該種抗體，則⑥導入受體細胞過程中受體細胞通常選用土壤農桿菌，經過篩選后再侵染棉花體細胞，轉化成功后通過植物組織培養技術，即脫分化和再分化過程，獲得能產抗體的轉基因棉花植株。