Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）自生固氮菌是一種能獨(dú)立固定氮?dú)獾募?xì)菌，其中有些好氧種類能產(chǎn)生PHB（一種生物可降解的熱塑性塑料）。現(xiàn)欲從活性污泥中分離、純化、篩選出高產(chǎn)PHB的固氮菌，操作流程如下：采集土樣→富集培養(yǎng)→分離、純化培養(yǎng)→初步篩選PHB固氮菌→篩選高產(chǎn)PHB固氮菌→保存?zhèn)溆谩Ｕ埢卮穑?/span>

（1）富集培養(yǎng)時，為達(dá)到篩選自生固氮菌的目的，在配制培養(yǎng)液時不應(yīng)添加___________。培養(yǎng)時要將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在搖床上振蕩培養(yǎng)，其目的是為細(xì)菌的生長提供。

（2）用于篩選高表達(dá)量菌株的方法之一是經(jīng)涂布分離獲得__________。進(jìn)行分離、純化培養(yǎng)時，要先將培養(yǎng)基倒入__________中，制成平板，此時所使用的培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)時有所不同，添加了一定量的__________。

（3）在純化過程中，在固體培養(yǎng)基上劃線時，下列操作正確的是__________。

A.接種環(huán)采用70%酒精滅菌

B.接種時應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行

C.劃線時要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線相連

D.劃線分離時，需要把接種環(huán)深入到培養(yǎng)基中進(jìn)行接種

（二）下圖表示細(xì)胞融合技術(shù)的部分過程，請回答：

（1）若甲、乙細(xì)胞是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合時，首先需將___________消化除去。獲得的丁細(xì)胞在植物組織培養(yǎng)是通過平衡___________配比進(jìn)行調(diào)控，從而實現(xiàn)植物器官、組織的發(fā)生和形態(tài)建成。

（2）若該過程是制備癌胚抗原單克隆抗體的部分過程，實驗中首先將___________注入小鼠體內(nèi)，然后從產(chǎn)生免疫反應(yīng)的小鼠脾臟中獲取經(jīng)免疫的___________細(xì)胞，將其與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出___________細(xì)胞。

（3）若甲、乙細(xì)胞到丙細(xì)胞過程是哺乳動物體外受精過程，甲、乙細(xì)胞能夠結(jié)合的基礎(chǔ)是細(xì)胞膜表面有特異性___________功能的蛋白。若丁細(xì)胞為囊胚的外表扁平細(xì)胞，由其組成的結(jié)構(gòu)稱為___________。

Answer 1

【答案】 含氮物質(zhì)（氮源）充足的氧氣 單菌落 培養(yǎng)皿 瓊脂糖 B 細(xì)胞壁 植物激素 癌胚抗原 B淋巴 雜交瘤 識別 滋養(yǎng)層

【解析】由題干可知該題考查微生物的純化和培養(yǎng)及細(xì)胞融合想知識，主要考察考生對知識點(diǎn)的識記、理解掌握程度。

一、（1）因為要分離固氮菌，所以可以選用不加氮源的培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選。而培養(yǎng)時要將裝有培養(yǎng)液的錐形瓶放置在搖床上振蕩培養(yǎng)，其目的是為細(xì)菌的生長提供充足的氧氣。

（2）用于篩選高表達(dá)量菌株的方法主要有平板劃線法和稀釋涂布平板法，都是為了獲得單菌落，所以經(jīng)涂布分離可以獲得單菌落。制平板時需要將滅過菌的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中進(jìn)行凝固。此時所使用的培養(yǎng)基與富集培養(yǎng)時有所不同，添加了一定量的瓊脂，因為富集培養(yǎng)基是液體，而此時的是固體，需要添加凝固劑瓊脂。

（3）在純化過程中，在固體培養(yǎng)基上劃線時，一定要注意嚴(yán)格無菌條件，其中接種環(huán)采用灼燒滅菌，A錯誤。接種時應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行，B正確。劃線時最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)的劃線不能相連，C錯誤。劃線分離時，需要把接種環(huán)接觸到培養(yǎng)基中進(jìn)行接種，而不能深入到培養(yǎng)基中，D錯誤。

二、（1）若甲、乙細(xì)胞是植物細(xì)胞，在細(xì)胞融合時，首先需將具有保護(hù)作用的細(xì)胞壁用纖維素酶和果膠酶去掉，才能獲得原生質(zhì)體。獲得的丁細(xì)胞即雜種植物細(xì)胞在植物組織培養(yǎng)是通過平衡植物激素（主要是生長素和細(xì)胞分裂素）配比進(jìn)行調(diào)控，從而實現(xiàn)植物器官、組織的發(fā)生和形態(tài)建成。

（2）若該過程是制備癌胚抗原單克隆抗體的部分過程，實驗中首先將抗原即癌胚抗原注入小鼠體內(nèi)，然后從產(chǎn)生免疫反應(yīng)的小鼠脾臟中獲取經(jīng)免疫的B淋巴細(xì)胞，將其與骨髓瘤細(xì)胞融合，篩選出既能產(chǎn)生特異性抗體還能大量增殖的雜交瘤細(xì)胞。

（3）若甲、乙細(xì)胞到丙細(xì)胞過程是哺乳動物體外受精過程，甲、乙細(xì)胞能夠結(jié)合的基礎(chǔ)是細(xì)胞膜表面有特異性識別功能的蛋白。若丁細(xì)胞為囊胚的外表扁平細(xì)胞，由其組成的結(jié)構(gòu)稱為滋養(yǎng)層細(xì)胞，內(nèi)部是具有發(fā)育全能性的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)。