Question

【題目】普通煙草轉入抗鹽基因培育抗鹽煙草的過程如下圖所示。已知含抗鹽基因的DNA和質粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位點，質粒上另有抗四環素基因和抗氨芐青霉素基因。請回答問題：

（1）構建重組質粒時，應選用的限制酶是____________，然后對質粒和________進行切割，以保證它們定向連接。

（2）質粒的基本單位是 。

（3）切割后的目的基因與質粒由_______酶連接成重組質粒。篩選導入重組質粒的細菌，應在培養基中加入______________________________，

理由是___________________________________________________________________。

（4）若質粒被某一限制酶識別的序列是一GAATTC一，并在G與A之間切割。請畫出被切割后所形成的黏性末端

Answer 1

【答案】

（1）salⅠ、 HindⅢ酶 含抗鹽基因的DNA

（2） 脫氧核苷酸

（3）DNA連接 氨芐青霉素 因為重組質粒帶有抗氨芐青霉素基因，在添加青霉素的培養基中可以存活

（4）

一G↓GATCC一 一G GATCC一

→ +

一CCTAG↓G一 一CCTAG G一

【解析】

（1）分析題圖可知，構建重組質粒時，應選用salⅠ酶和HindⅢ酶對含抗鹽基因的外源DNA和質粒進行切割，這樣會形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、質粒的自身連接，以保證目的基因和質粒的定向連接．限制酶切斷的是DNA分子中特定部位的兩個脫氧核苷酸的脫氧核糖和磷酸之間的磷酸二酯鍵．

（2）質粒的基本單位是脫氧核苷酸。

（3）DNA連接酶可將切割后的目的基因與質粒連接成重組質粒．根據圖中信息可知重組質粒帶有抗氨芐青霉素基因，但四環素基因已被限制酶破壞，所以在篩選導入重組質粒的細菌時，可在不同培養基中分別加入氨芐青霉素、四環素，在添加氨芐青霉素的培養基中能成活，但在添加四環素的培養基中不能成活的即為導入重組質粒的細菌．

（4）見答案。