Question

【題目】Rag2基因缺失小鼠不能產生成熟的淋巴細胞。科研人員利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療，其技術流程如圖（圖中數字序號表示的是相關過程）。請回答下列有關問題：

（1）過程②利用的技術是______________，過程③中涉及到了基因工程技術，其中作為受體細胞的是____________。

（2）過程③中獲取的目的基因是_______________，可以根據該基因的___________________設計引物，利用PCR技術擴增目的基因片段。按此方法和圖示技術流程，完成基Rag2基因缺失小鼠的基因治療涉及的酶有____________和耐高溫的DNA聚合酶(Taq酶)等。

（3）圖中造血干細胞中的遺傳物質至少有___________個來源。為檢測Rag2基因的表達情況，可提取治療后小鼠骨髓細胞的蛋白質，用____________進行雜交實驗。圖中所述克隆技術屬于___________克隆。

Answer 1

【答案】 早期胚胎培養 ES細胞 (正常的）Rag2基因 脫氧核苷酸序列(或堿基對序列或遺傳信息） 限制性核酸內切酶、DNA連接酶和胰蛋白酶 三 抗Rag2蛋白的抗體 治療性(或體細胞核移植等）

【解析】分析題圖：圖示是利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療的過程圖解，其中①表示核移植過程，②表示早期胚胎培養過程，③表示采用基因工程技術將目的基因導入受體細胞。

（1）結合前面的分析可知，過程②利用的技術是早期胚胎培養，過程③中涉及到了基因工程技術，其中作為受體細胞的是ES細胞。

（2）圖示利用胚胎干細胞（ES細胞）對Rag2基因缺失小鼠進行基因治療，可推知過程③中獲取的目的基因是（正常的）Rag2基因。步驟③中，在構建含有Rag2基因的表達載體時，可以根據Rag2基因的脫氧核苷酸序列設計引物，利用PCR技術擴增Rag2基因片段。分離、培養ES細胞過程中需要用胰蛋白酶分散細胞。PCR技術擴增過程中用耐高溫的DNA聚合酶（Taq酶），基因導入過程中需要用限制性酶核酸內切酶和DNA連接酶。

（3）圖中造血干細胞中的遺傳物質至少有3個來源：上皮細胞的核基因、卵母細胞的質基因和Rag2基因。為檢測Rag2基因的表達情況，可采用抗原-抗體雜交法，即提取治療后的小鼠骨髓細胞的蛋白質（抗原），用抗Rag2蛋白的抗體進行雜交實驗。根據圖形分析可知：基因導入在體外進行的，因此，該治療方式屬于體外基因治療，圖中所述克隆技術也屬于治療性克隆。