Question

【題目】下面是將某細菌的基因A導入大腸桿菌內，制備“工程菌”的示意圖：

請據圖回答：

（1）獲得A有兩條途徑：一是以A的mRNA為模板，在 酶的催化下，合成互補的單鏈DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需基因；二是根據目標蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的mRNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測其DNA的 序列，再通過化學方法合成所需基因。

（2）利用PCR技術擴增DNA時，需要在反應體系中添加的有機物質有 、 、4種脫氧核苷酸三磷酸和 酶，擴增過程可以在PCR擴增儀中完成。

（3）在基因工程中，利用大腸桿菌生產胰島素時，構建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子，其中啟動子的作用是 。在用表達載體轉化大腸桿菌時，常用 處理大腸桿菌，其目的是使其成為 細胞，有利于吸收重組DNA分子。為了檢測胰島素基因是否轉錄出了mRNA，可利用 技術；為了檢測胰島素基因轉錄出的mRNA是否翻譯成蛋白質，常用 技術。

Answer 1

【答案】（1）逆轉錄（或“反轉錄”） 脫氧核苷酸

（2）引物 模板（A基因）（兩空可調換位置） 熱穩定DNA聚合（或“Taq”）

（3）RNA聚合酶識別和結合的部位 Ca2＋ 感受態 分子雜交 抗原—抗體雜交

【解析】

試題分析：（1）獲得A有兩條途徑：一是以A的mRNA為模板，在逆轉錄酶的催化下，合成合成雙鏈DNA，從而獲得所需基因；二是根據目標蛋白質的氨基酸序列，推測出相應的mRNA序列，然后按照堿基互補配對原則，推測其DNA的脫氧核苷酸序列，再通過人工合成（化學）方法合成所需基因。

（2）利用PCR技術擴增DNA時所需的條件：引物、模板DNA（目的基因或A基因）、原料（4種脫氧核糖核苷酸）和耐熱性的DNA聚合酶等。

（3）啟動子是RNA聚合酶識別和結合的位點，有了它才能驅動基因轉錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質．在用表達載體轉化大腸桿菌時，常用Ca2+處理大腸桿菌，使大腸桿菌變成感受態細胞，以利于表達載體進入；為了檢測胰島素基因是否轉錄出了mRNA，可用標記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術稱為DNA分子雜交技術．為了檢測胰島素基因轉錄的mRNA是否翻譯成人胰島素，常用抗原-抗體雜交技術。