Question

【題目】基因工程重要環節是構建基因表達載體。圖1為限制酶EcoRⅠ的識別序列和切割位點，圖2表示DNA片段，圖3表示目的基因及限制酶切點，圖4表示質粒。請回答下列問題：

（1）若圖2就是圖1中的最左邊顯示的三個堿基對，則④⑤⑥⑦⑧⑨對應的堿基依次是_________。限制酶EcoRⅠ切割外源DNA，切開的位置是圖2中編號為______位置的________鍵。

（2）圖3中的A、B、C、D為與目的基因兩端配對的四種單鏈DNA片段，在不同情況下可以作為引物，在PCR技術中，擴增此目的基因，應該選用________兩個作為引物。該DNA分子在PCR儀中經過4次循環后會產生目的基因片段__________個。

（3）圖4中，如果用限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ對此質粒進行三種方法切割。第一種方法用其中一種酶、第二種方法用其中兩種酶、第三種方法用其中三種酶分別切割，依次產生_______、_______、_____三種片段，三種方法總共可以形成________種不同的片段，其中含有完整抗四環素基因的DNA片段有______種。

Answer 1

【答案】 AAGTTC ③ 3，5磷酸二酯鍵 B和C 16 3 6 3 9 3

【解析】[分析]：1.基因工程的工具之一是限制酶：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂。2.基因工程中的限制酶和DNA連接酶的作用位點都是③磷酸二酯鍵處，解旋酶作用于①氫鍵。3.DNA是半保留復制，DNA復制中子鏈的延伸方向5′→3′。

（1）圖1中EcoRⅠ切割的是相鄰核苷酸之間的磷酸二酯鍵，若圖2就是圖1中的最左邊顯示的三個堿基對，則EcoRⅠ切割的是圖2中③位置的3，5磷酸二酯鍵，則圖2的⑥為G，⑨為C，④⑤為AA，⑦⑧為TT；

（2）因為DNA復制子鏈的延伸方向是5′→3′若利用PCR技術增加目的基因的數量，由圖3可知，A、B、C、D四種單鏈DNA片段中應選取 B和C 作為引物；該DNA分子在PCR儀中經過4次循環后會產生基因片段24=16個。

（3）由圖4可知限制酶PstⅠ、EcoRⅠ和HindⅢ對此質粒的切割點不同，如果用這三種酶分別切割該質粒，可產生3種DNA片段。若Pst I酶的切割位點用1表示，EcoR I酶的切割位點用2表示，HindⅢ酶的切割位點用3表示，則如果用其中任意兩種酶切割，可產生1→2，2→1，2→3，3→2，1→3，3→1六種DNA片段（按順時針方向）。如果用三種酶同時切割，可產生1→2，2→3，3→1共3種DNA片段。三種方法總共可以形成9種不同的片段，其中HindⅢ酶切割位點在抗四環素基因上，因此含有完整抗四環素基因的DNA片段有2→1片段、方法一中限制酶PstⅠ、EcoRⅠ切割的2種DNA片段共3種。

[點睛]：本題考查DNA的結構和復制、基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作工具和操作步驟，結合題圖分析DNA結構特點，限制酶作用特點，理解PCR中引物的作用，分析子鏈的延伸方向，答題時認真分析，盡可能用教材語言規范答題。