Question

【題目】2019年1月24日，中科院神經科學研究所的科學家經過兩年努力，利用CRISPR/Cas9技術，成功得到五只BMAL1基因被敲除的克隆猴，可作為研究生物節律紊亂等人類疾病的動物模型。如圖為體細胞核移植技術培育食蟹猴的操作過程，回答下列問題。

（1）獲得食蟹猴的體細胞核移植技術的難度明顯高于胚胎細胞核移植，原因___________。

（2）進行過程①時，為提供成纖維細胞培養所需的無菌無毒環境，應定期更換培養基，其目的是___________。

（3）過程③是利用___________法將成纖維細胞注入食蟹猴去核的減數第二次分裂中期的卵母細胞中。

（4）過程⑤的實質是早期胚胎在___________條件下空間位置的轉移。胚胎移植的方法分為_______兩種。

（5）CRISPR/Cas9是生物學研究中的一項革命性技術, 其原理是由一條單鏈向導RNA引導核酸內切酶Cas9到一個特定的基因位點進行切割．通過設計向導RNA中20個堿基的識別序列，可人為選擇DNA上的目標位點進行切割（見圖）

向導RNA可在___________催化下合成。Cas9蛋白的作用是破壞DNA特定位點核苷酸之間的磷酸二酯鍵。將Cas9基因導入猴細胞時需要構建基因表達載體，目的是_____________。

Answer 1

【答案】體細胞分化程度高，恢復其全能性較難 防止成纖維細胞代謝產物積累對細胞自身造成危害 顯微注射 相同生理環境 手術法和非手術法 RNA聚合酶 使目的基因在受體細胞中穩定存在，并遺傳給下一代，使目的基因能表達和發揮作用

【解析】

動物細胞培養的條件為無菌、無毒，需要適宜的溫度和PH，培養基中除正常的有機和無機營養外，還需加入血漿（血清）等一些天然成分；另外還需要氣體條件，即加95%的空氣和5％CO2，其中5％的CO2的作用是維持培養液的pH值。將細胞核導入動物細胞常用顯微注射法。

（1）由于體細胞分化程度高，恢復其全能性較難，所以體細胞核移植技術的難度明顯高于胚胎細胞核移植。

（2）動物細胞培養為無菌、無毒的環境，可在培養液中加入抗生素，或定期更換培養液，防止成纖維細胞代謝產物積累對細胞自身造成危害。

（3）由圖可知，過程③是利用顯微注射法將成纖維細胞注入食蟹猴去核的減數第二次分裂中期的卵母細胞中。

（4）過程⑤為胚胎移植，實質是早期胚胎在相同生理環境條件下空間位置的轉移。胚胎移植的方法分為手術法和非手術法兩種。

（5）RNA的形成需要RNA聚合酶的催化。構建基因表達載體的目的是使目的基因在受體細胞中穩定存在，并遺傳給下一代，使目的基因能表達和發揮作用。