Question

【題目】微生物的分離、培養和計數是現代生物工程應用中的重要環節。圖示為大腸桿菌分離和培養過程中部分操作示意圖。請分析回答下列問題。

（1）實驗過程中對培養皿和實驗操作者的雙手所采用的滅菌或消毒方法依次是______、_______。

（2）培養大腸桿菌時，在接種前需要檢測培養基是否被污染。對于固體培養基應采用的檢測方法是___________。

（3）圖示是利用____________法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。在灼燒接種環之后，要等其冷卻后再進行劃線的原因是____________。

（4）關于圖示的操作方法和結果正確的是___________。

A．操作前要將接種環放在火焰邊灼燒滅菌

B．劃線操作須在火焰上進行

C．在5區域中才可以得到所需菌落

D．在12345區域中劃線前后都要對接種環滅菌

（5）若要培養具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，制備選擇培養基時在基本培養基的基礎上需要__________。

Answer 1

【答案】干熱滅菌 化學消毒 將未接種的培養基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養基上是否有菌落產生 平板劃線 以免接種環溫度太高，殺死菌種 D 添加高濃度蔗糖(葡萄糖)和調低pH（或高糖和酸性的篩選環境）

【解析】

無菌操作技術有消毒和滅菌，消毒有煮沸消毒法、巴氏消毒法和化學藥劑消毒法，滅菌有灼燒滅菌法（適用于接種工具）、干熱滅菌法（適用于玻璃器皿和金屬工具）、高壓蒸汽滅菌法（適用于培養基及容器的滅菌）。題圖中使用劃線分離法和稀釋涂布分離法分離大腸桿菌，利用平板劃線法接種，需要注意的是接種環在劃線時每次劃線前要灼燒，冷卻后從上一區劃線末端開始劃，劃線首尾區不重疊；稀釋涂布法是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，在適宜條件下培養，在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養基表面形成單個的菌落。

（1）實驗過程中對培養皿和實驗操作者的雙手所采用的滅菌或消毒方法依次是干熱滅菌、化學消毒。

（2）檢測固體培養基是否被污染應采用的檢測方法是將未接種的培養基在適宜的溫度下放置適宜的時間，觀察培養基上是否有菌落產生。

（3）據圖可知，圖示是利用平板劃線法進行微生物接種，把聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。在灼燒接種環之后，要等其冷卻后再進行劃線，原因是以免接種環溫度太高，殺死菌種。

（4）劃線的順序為12345，操作前要將接種環放在火焰上灼燒滅菌，劃線操作須在火焰旁進行，在12345區域中劃線前后都要對接種環滅菌，在5個區域中都有可能得到菌落，故D正確。

（5）若要培養具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌，制備選擇培養基時在基本培養基的基礎上需要添加高濃度蔗糖(葡萄糖)和調低pH（或高糖和酸性的篩選環境）。