Question

【題目】嗜熱土壤芽胞桿菌產生的P-葡萄糖苷酶（BglB)是一種耐熱纖維素酶，為使其大量生產，科學家打算利用轉基因技術使大腸桿菌表達BglB酶，開展了以下試驗：

注：圖中限制酶的識別序列及切割形成的黏性末端均不相同

(1) 根據所學細胞學有關知識，利用大腸桿菌 (能、不能）生產人的糖蛋白，你作出判斷的理由是 。

(2) 大腸桿菌經常作為基因工程的受體細胞，其優點是 。

(3) PCR擴增時，可以從 的基因組文庫中獲取bglB基因作為模板。

(4) 如圖為所選質粒的酶切圖譜，bglB基因兩端不含圖中限制酶的識別序列，為使bglB基因能重組進該質粒并構建表達載體，擴增的bglB基因兩端應當加上 酶或 酶的識別序列。

(5) 若某種限制酶切割形成的DNA片段如下，則可以選擇 進行連接，連接后可形成的DNA片段為 (寫出兩種）。

…AC GC… …GC GT…

…TG CG… …CG CA…

Answer 1

【答案】（1)不能（1分） 原核細胞沒有內質網、高爾基體，不能對糖蛋白進行加工 (2) 繁殖快、遺傳物質少、單細胞 (3) 嗜熱土壤芽胞桿菌 (4) NdeI BamHI (5) T4DNA連接酶 （寫出兩種，合理即可）

…ACGC… 或 …ACGT… 或…GCGC… 或 …GCGT…

…TGCG… …TGCA… …CGCG… …CGCA…

【解析】（1）大腸桿菌是原核生物，細胞內沒有內質網和高爾基體等細胞器，所以利用大腸桿菌不能產生糖蛋白這樣的分泌蛋白。（2）基因工程中常常選用大腸桿菌作為的受體細胞，其優點是單細胞生物，繁殖快、遺傳物質少。（3）根據題意可知，嗜熱土壤芽胞桿菌產生的β-葡萄糖苷酶（BglB），因此PCR擴增bglB基因時，選用嗜熱土壤芽孢桿菌基因組DNA作模板。（4）根據啟動子和終止子的生理作用可知，目的基因應導入啟動子和終止子之間．圖中看出，兩者之間存在三種限制酶切點，但是由于Xbal在質粒上不止一個酶切位點，因此為使PCR擴增的bglB基因重組進該質粒，擴增的bglB基因兩端需分別引入NdeⅠ和BamHⅠ不同限制酶的識別序列。（5）能將平末端的DNA片段連接起來的連接酶只有T4DNA連接酶。結合圖示，連接后可形成的DNA片段為…ACGC… 或 …ACGT… 或…GCGC… 或 …GCGT…

…TGCG… …TGCA… …CGCG… …CGCA…