Question

【題目】神經纖毛蛋白-1（NRP-1）是血管內皮生長因子的新型受體，通過參與多種信號轉導來促進腫瘤血管的生成。本研究將為NRP-1單克隆抗體靶向治療乳腺癌提供數據基礎。

（1）取乳腺癌（MCF7）組織塊，運用__________技術獲得MCF7細胞用于后續實驗。用重組的人_________蛋白對小鼠進行注射，使小鼠產生免疫反應，制備雜交瘤細胞，將雜交瘤細胞轉到多孔培養板上培養，吸取培養孔中的__________（填“上清液”或“沉淀細胞”），應用__________技術進行抗體陽性檢測。經多次篩選和細胞培養，獲得NRP-1單克隆抗體（NRP-1 MAb）。

（2）提取正常組織細胞和MCF7細胞的總蛋白，設置空白對照，加入NRP-1 MAb進行蛋白質免疫印跡，實驗結果如下：

該實驗結果說明了__________。

（3）將MCF7細胞制成單細胞懸液，等量注入4組裸鼠右前腋下，接種后3天開始給藥，共給藥7次。每隔5天測算一次腫瘤的體積，如下圖所示：

對照組注射__________，從上圖中可以看出__________。

（4）結合題干信息，綜合以上研究請你推測NRP-1 MAb抑制腫瘤的作用機理是__________。

（5）注射不同劑量NRP-1 MAb 33天后，剝離腫瘤組織稱重，實驗結果如下圖：

從該結果中可以看出____。綜合比較（3）和（5）的實驗結果，可見中高劑量和低劑量的NRP-1 MAb在降低腫瘤體積和降低腫瘤重量上出現了不一致性。

（6）基于以上研究，科學家們對該抗體的用藥方式有兩種觀點：謹慎用藥和適宜濃度用藥。你支持哪個觀點，并說出理由______。

Answer 1

【答案】動物細胞培養技術 神經纖毛蛋白-1（NRP-1） 上清液 抗原—抗體雜交技術 NRP-1在MCF7細胞中高表達 等量的生理鹽水 NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的效果更顯著 NRP-1在MCF7細胞中高表達，NRP-1 MAb與NRP-1特異性結合，阻斷了血管內皮生長因子與NRP-1的結合，抑制了腫瘤血管生成，進而降低了腫瘤的體積。 NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤組織的重量，中、高劑量抗體的降低效果稍微沒有低濃度的好，不同劑量降低效果的差異并不顯著。 支持謹慎用藥理由：隨著治療時間的延長，這種不一致性可能會加大，應進行后續研究，現階段謹慎用藥。支持適宜濃度用藥理由：該抗體已經顯示了顯著的抑瘤效果，這種不一致性很小，可以考慮適宜濃度用藥

【解析】

動物細胞融合，又稱細胞雜交，指將兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程，融合后形成具有原來兩個或多個細胞遺傳信息的單核細胞，稱為雜交細胞。

單克隆抗體制備的過程中需要經過兩次篩選，第一次用選擇培養基篩選出雜交瘤細胞；第二次用專一抗體檢測篩選出能產生特定抗體的雜交瘤細胞。

（1）取乳腺癌（MCF7）組織塊，需要用胰蛋白酶或膠原蛋白酶進行分散處理后，運用動物細胞培養技術獲得MCF7細胞。要制備NRP-1單克隆抗體，需要用重組的人NRP-1蛋白對小鼠進行注射，使小鼠產生免疫反應，產生相應的漿細胞，與該漿細胞與骨髓瘤細胞進行融合處理，制備雜交瘤細胞。將雜交瘤細胞轉到多孔培養板上培養，可以從培養液即上清液中提取到單克隆抗體，可以用抗原-抗體雜交技術進行抗體陽性檢測。經多次篩選和細胞培養，獲得NRP-1單克隆抗體（NRP-1 MAb）。

（2）根據實驗結果可知，只有MCF7細胞中蛋白可以與NRP-1 MAb發生免疫反應，說明NRP-1在MCF7細胞中高表達。

（3）實驗的自變量是給藥的劑量和時間，因變量是腫瘤的體積，對照組應該注射等量的生理鹽水，根據實驗結果可知，NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤的體積，中、高劑量抗體的降低效果比低劑量的效果更顯著。

（4）根據“神經纖毛蛋白-1（NRP-1）是血管內皮生長因子的新型受體，通過參與多種信號轉導來促進腫瘤血管的生成”及實驗數據NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤的體積可知，NRP-1在MCF7細胞中高表達，NRP-1 MAb與NRP-1特異性結合，阻斷了血管內皮生長因子與NRP-1的結合，抑制了腫瘤血管生成，進而降低了腫瘤的體積。

（5）注射不同劑量NRP-1 MAb 33天后，剝離腫瘤組織稱重，根據實驗數據可知，NRP-1 MAb能夠有效地降低腫瘤組織的重量，中、高劑量抗體的降低效果稍微沒有低濃度的好，不同劑量降低效果的差異并不顯著。

（6）綜合比較（3）和（5）的實驗結果，可見中高劑量和低劑量的NRP-1 MAb在降低腫瘤體積和降低腫瘤重量上出現了不一致性。根據上述研究結果可知，隨著治療時間的延長，這種不一致性可能會加大，應進行后續研究，故現階段應該支持謹慎用藥。