Question

【題目】圖甲是從土壤中篩選產脲酶細菌的過程，圖乙是脲酶基因轉錄的 mRNA 部分序列。

（1）圖中選擇培養基應以____________為唯一氮源；鑒別培養基還需添加____________作指示劑，產脲酶細菌在該培養基上生長一段時間后，其菌落周圍的指示劑將變成____________色。

（2）該小組采用稀釋涂布平板法檢測水樣中的細菌含量。在涂布接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養了一段時間，這樣做的目的是______________________；然后，將 1 mL水樣稀釋 100 倍，在 3 個平板上用涂布法分別接入 0.1 mL 稀釋液；經適當培養后，3 個平板上的菌落數分別為 39、38 和 37。據此可得出每升水樣中的活菌數為________。

（3）該小組采用平板劃線法分離水樣中的細菌，操作時，接種環通過________滅菌，在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線。這樣做的目的是___________。

（4）現有一菌株的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉錄的 mRNA 在圖乙箭頭所示位置增加了 70 個核苷酸，使圖乙序列中出現終止密碼(終止密碼有 UAG、UGA 和 UAA)。突變基因轉錄的 mRNA 中，終止密碼為________，突變基因表達的蛋白含________個氨基酸。

Answer 1

【答案】尿素 酚紅 紅 檢測培養基平板滅菌是否合格 3.8×107 灼燒 將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個菌落 UGA 115

【解析】

本題考查分解尿素微生物的分離、培養和鑒別，同時考查了必修的基因突變和基因表達知識，要求考生識記分解尿素微生物的氮源的選擇、試劑的種類、掌握微生物計數的方法

（1）據題干信息，要篩選產脲酶細菌的過程，因此培養基中需以尿素為唯一氮源。脲酶將尿素分解產生氨，培養基pH升高，加入酚紅指示劑，變為紅色，因此鑒別尿素分解菌需在培養基中添加酚紅指示劑。

（2）微生物培養過程應該進行無菌操作，配制的培養基要進行高壓蒸汽滅菌，可以將滅菌后的空白平板進行培養以檢測培養基滅菌是否徹底；由由題意知1ml水樣中的菌落數是（39+38+37）÷3÷0.1×100=3.8×104個，每升水樣中的活菌數為3.8×104×103=3.8×107。

（3）對接種環常用的滅菌方法是灼燒滅菌；在第二次及以后的劃線時，總是從上一次劃線的末端開始劃線的目的是；將聚集的菌體逐漸稀釋分散以便獲得由單個細胞繁殖而來的菌落。

（4）mRNA三個相鄰堿基決定一個氨基酸，箭頭處插入70個堿基，加上緊鄰的AG，共決定24個氨基酸，然后出現終止密碼UGA，箭頭前共273個堿基，決定91個氨基酸，因此突變后的基因表達的蛋白質中含有115個氨基酸。

	優點	缺點	適用范圍
平板劃 線分離法	可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離	不能計數	適用于好氧菌
稀釋涂布 平板法	可以計數，可以觀察菌落特征	吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延	適用于厭氧，兼性厭氧