Question

【題目】補充正常凝血因子F8可以治療甲型血友病，因此可以利用轉基因技術人工生產F8．某種大腸桿菌的質粒中含有β﹣半乳糖苷酶α片段序列，大腸桿菌的DNA分子中則含有β﹣半乳糖酶ω片段序列，由于天然大腸桿菌同時具備這兩種片段序列，可以使培養基中含有X﹣gal底物轉變成藍色產物，當缺少任意一個α或ω片段序列，X﹣gal底物不能轉變成藍色產物．HindⅢ、EcoRI、BamHI分別為三種限制性內切酶，如圖中箭頭所指為三種限制酶的切點．
（1）應選用的限制性內切酶是 ， 選擇的依據是 ．
（2）限制酶作用的化學鍵是 ．
（3）控制F8的基因也可以通過人體細胞相應的mRNA來合成，該合成的過程稱為 ． 將經轉基因技術處理過的質粒導入大腸桿菌后，再將大腸桿菌接種到含有X﹣gal底物的培養基培養一段時間后，培養基中出現較多的藍色菌落，這是因為 ．

Answer 1

【答案】
（1）EcoRⅠ；切斷α片段序列，為重組DNA分子的篩選提供標記
（2）磷酸二酯鍵
（3）逆轉錄（反轉錄）；同一種限制酶作用的目的基因、質粒具有相同的黏性末端，因此會出現質粒的自我環化的空載現象，空載質粒含有完整的α或ω片段序列，能利用培養基中的X﹣gal底物產生藍色產物
【解析】解：（1）當大腸桿菌缺少任意一個α或ω片段序列，X﹣gal底物不能轉變成藍色產物，所以要破壞質粒中的α片段序列（含兩個酶切位點：HindⅢ、EcoRI），利用X﹣gal底物來檢測目的基因是否轉入大腸桿菌．而α片段序列上含有HindⅢ、EcoRI兩種限制性內切酶的切割位點，但HindⅢ位于目的基因上，所以不能用該酶切割，因此應選用限制性內切酶EcoRI切割外源DNA和質粒．（2）限制酶作用于DNA分子的磷酸二酯鍵，使DNA分子斷裂．（3）通過mRNA來合成基因的過程稱為逆轉錄．由于用同一種限制酶作用的目的基因、質粒具有相同的黏性末端，因此會出現質粒的自我環化的空載現象，空載質粒含有完整的α、ω片段序列，能利用培養基中的X﹣gal底物產生藍色產物． 所以答案是（1）EcoRⅠ；切斷α片段序列，為重組DNA分子的篩選提供標記；（2）磷酸二酯鍵；（3）逆轉錄（反轉錄）；同一種限制酶作用的目的基因、質粒具有相同的黏性末端，因此會出現質粒的自我環化的空載現象，空載質粒含有完整的α或ω片段序列，能利用培養基中的X﹣gal底物產生藍色產物
【考點精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術的相關知識點，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術才能正確解答此題．