Question

【題目】下圖是某科研所以小鼠為材料制備某抗原的單克隆抗體及研究胚胎干細胞分化條件的流程圖。請回答相關 問題：

（1）①過程需用__________處理以將組織分散成單個細胞。圖中選用的A細胞一般是傳代__________的細胞。圖中去核卵母細胞是通過__________法去除卵母細胞中的核得到的。

（2）胚胎干細胞在形態上的特點是____________________。③過程需要向培養液中加入________，如牛磺酸、丁酰環腺苷酸等化學物質，從而誘導胚胎干細胞向不同類型的組織細胞分化。

（3）④過裎常用的生物誘導因素是__________________。④過程中產生的融合細胞的類型有_______（用YY細胞表述）。

（4）簡述⑤過程中要進行哪兩次篩選？_________________________________。

Answer 1

【答案】 胰蛋白酶或膠原蛋白酶 10代以內 顯微操作 體積小、細胞核大、核仁明顯 分化誘導因子 滅活的病毒 X自身融合細胞、Y自身融合細胞、X—Y融合細胞 —次是通過具有篩選作用的培養基篩選出雜交瘤細胞，另一次是通過抗原一抗體雜交篩選出能分泌所需特異性抗體的雜交瘤細胞

【解析】動物細胞培養就是從動物機體中取出相關的組織，將它分散成單個細胞，然后放在適宜的培養基中，讓這些細胞生長和增殖；取動物組織塊→剪碎組織→用胰蛋白酶處理分散成單個細胞→制成細胞懸液→轉入培養液中（原代培養）→放入二氧化碳培養箱培養→貼滿瓶壁的細胞用酶分散為單個細胞，制成細胞懸液→轉入培養液（傳代培養）→放入二氧化碳培養箱培養；單克隆抗體的制備過程：制備產生特異性抗體的B淋巴細胞→獲得雜交瘤細胞→克隆化培養和抗體檢測→將雜交瘤細胞在體外培養或注射到小鼠腹腔內增殖→提取單克隆抗體：從細胞培養液或小鼠的腹水中提取。

詳解（1）動物組織細胞之間含有多種胞外蛋白，如膠原蛋白，使細胞間或細胞與培養瓶內壁粘連起來，因此①過程需用胰蛋白酶分解這些蛋白質后就可以使組織細胞分散成單個細胞。核移植時選擇的供核一方一般是傳代10代以內細胞，原因是細胞能保持正常的二倍體核型（遺傳物質不發生改變）。圖中去核卵母細胞是通過顯微操作法去除卵母細胞中的核得到的。

（2）胚胎干細胞具有胚胎細胞的特性，在形態上，表現為體積較小，細胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發育的全能性，可分化為成年動物任何一種組織細胞。③過程是誘導細胞分化的過程，需要向培養液中加入分化誘導因子，如牛磺酸、丁酰環腺苷酸等化學物質，從而誘導胚胎干細胞向不同類型的組織細胞分化。

（3）④過裎為誘導細胞融合的過程，常用的生物誘導因素是滅活的病毒。④過程中產生的融合細胞的類型有X自身融合細胞、Y自身融合細胞、X—Y融合細胞。

（4）⑤過程是單克隆抗體的篩選過程，融合的結果是有很多不符合要求的；如有B淋巴細胞自身融合的細胞、骨髓瘤細胞自身融合的細胞等，所以要進行兩次篩選，—次是通過具有篩選作用的培養基篩選出雜交瘤細胞，另一次是通過抗原一抗體雜交篩選出能分泌所需特異性抗體的雜交瘤細胞。