Question

【題目】農業生產上有一種廣泛使用的除草劑在土壤中不易被降解，長期使用會污染土壤。為修復被污染的土壤，可按圖示程序選育出能降解該除草劑的細菌。已知該除草劑(含氮有機物)在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養基不透明。請分析回答：

(1)微生物接種是微生物學研究中最常用的基本操作技術，該技術的核心是_______。

(2) 在選育過程中，應將土壤浸出液接種于以該除草劑為唯一______的培養基上。通過比較單菌落周圍__________的大小，可篩選出高效的目的菌。實驗結果如右圖顯示的A～E五種菌株中，_______是最理想菌株。

(3) 若想對初步篩選得到的目的菌進行純化并計數，可采用的接種方法是_______。將lmL土壤溶液分別稀釋10倍和100倍，每種稀釋度各在3個平板上分別接入0.lmL稀釋液，經過適當培養后，6個平板上的菌落數分別為59、57、58和2、7、5，空白對照組的平板上沒有菌落，則每升土壤溶液中活菌數的理論值為_____________個。實際上每升土壤溶液中的活菌數比通過統計所得的這一數值要大，因為______________________。

(4) 科研人員用放射線處理該細菌，獲得突變株A和B，然后對突變株A和B進行實驗，結果如下表所示：

接種的菌種	一般培養基	實驗處理及結果
A	不生長	添加營養物質甲，能生長
B	不生長	添加營養物質乙，能生長
A＋B	能生長	不添加營養物質甲、乙，能生長

請分析突變株A和B混合在一起接種于一般培養基中能生長的最可能原因。___________________________________________。

Answer 1

【答案】 防止雜菌污染（無菌操作） 氮源 透明圈 E 稀釋涂布平板法 5.8×106 統計結果是用菌落數來表示的，當兩個或多個細菌連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落 突變株A生長需要營養物質甲，突變株B可以提供；突變株B生長需要營養物質乙，突變株A可以提供

【解析】試題分析：本題綜合考查學生對微生物的實驗室培養、微生物的分離與鑒定等相關知識的識記和理解能力。解答本題需熟記并理解相應的基礎知識并形成清晰的知識網絡。在此基礎上，結合問題情境，從題意和圖表中提取有效信息進行相關問題的解答。

(1) 微生物接種技術的核心是防止雜菌污染（無菌操作）。

(2) 已知該除草劑為含氮有機物，在水中溶解度低，含一定量該除草劑的培養基不透明；降解該除草劑的細菌能分解培養基中的該除草劑，使培養基中出現透明圈。可見，在選育能降解該除草劑的細菌的過程中，應將土壤浸出液接種于以該除草劑為唯一氮源的培養基上。通過比較單菌落周圍透明圈的大小，可篩選出高效的目的菌。實驗結果圖顯示的A～E五種菌株中，E菌落周圍的透明圈最大，因此E是最理想菌株。

(3) 對初步篩選得到的目的菌進行純化并計數，可采用稀釋涂布平板法進行接種。統計菌落數目時，一般選擇菌落數在30～300的平板進行計數，因此應選擇稀釋度為10倍的、分別接入0.lmL稀釋液的3個平板上菌落數（分別為59、57、58）進行統計，則每升土壤溶液中活菌數的理論值為[(59＋57＋58)÷3]×10 ÷(0.1×10-3)＝5.8×106個。由于統計結果是用菌落數來表示的，當兩個或多個細菌連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，所以實際上每升土壤溶液中的活菌數比通過統計所得的這一數值要大。

(4)分析表中信息可知：突變株A生長需要營養物質甲，突變株B生長需要營養物質乙，據此可推知，突變株A和B混合在一起接種于一般培養基中能生長的最可能原因是：突變株A生長需要營養物質甲，突變株B可以提供；突變株B生長需要營養物質乙，突變株A可以提供。