Question

【題目】美國科學工作者Mirkov發現菠菜細胞中有一種毒蛋白能攻擊很多細菌和真菌，欲培育產生毒蛋白抵抗柑橘青果病的柑橘新品種，其具體步驟如圖所示：

（1）柑橘莖段芽的芽尖細胞通過MS培養基培養出愈傷組織的過程叫做_____．

（2）利用某一時期菠菜體細胞內形成的mRNA通過逆轉錄過程形成互補DNA片段，與載體連接后儲存在受體菌群中，這些受體菌群被稱為菠菜的_____；要在短時間內大量擴增菠菜的毒蛋白基因可利用PCR技術，該技術一般要經歷三十多次循環，每次循環可以分為_____三步．如果開始的毒蛋白基因只有一個，第n次循環需要引物_____對．

（3）重組的Ti質粒上除了菠菜的毒蛋白基因、標記基因外，還必需要有_____等．將重組Ti質粒轉入農桿菌時，可以用_____處理農桿菌，使重組Ti質粒易于導入．將含有重組Ti質粒的農桿菌與柑橘愈傷組織共同培養時，通過培養基2的篩選培養，可以獲得導入成功的受體細胞，該篩選過程是通過在培養基2中加入_____實現的．

Answer 1

【答案】 脫分化 cDNA文庫 變性、復性和延伸 2n﹣1 啟動子和終止子 Ca2+ 潮霉素

【解析】試題分析：本題考查基因工程中培育轉基因生物的相關知識，分析基因工程的原理、PCR技術過程和植物組織培養的知識要點，再結合題意作答。

（1）柑橘的外植體通過MS培養基培養出愈傷組織的過程叫做脫分化。
（2）利用某一時期菠菜體細胞內形成的mRNA通過逆轉錄過程形成互補DNA片段，與載體連接后儲存在受體菌群中，這些受體菌群被稱為菠菜的cDNA文庫；在最開始的變性之前常要進行一次預變性。PCR的一個循環要經歷變性、復性和延伸三個步驟；第n次復制是從n-1次結束開始的，第n-1次結束后的基因有2n-1個，每個基因復制1次需要1對引物，第n次復制需要2n-1對引物。
（3）重組表達載體通常包括目的基因、標記基因、啟動子和終止子等；將目的基因導入微生物細胞最常用的轉化方法是用Ca2+處理細胞，使細胞處于感受態；在培養基中加有潮霉素，可以篩選出具有潮霉素抗性的細胞，用以獲得導入成功的受體細胞。