Question

【題目】下表是幾種限制酶識別序列及其切割位點，圖1、圖2中標注了相關限制酶的酶切位點，其中切割位點相同的酶不重復標注。請回答下列問題：

(1)用圖中質粒和目的基因構建重組質粒，應選用_________兩種限制酶切割，酶切后的載體和目的基因片段，通過_____酶作用后獲得重組質粒。

(2)為了篩選出轉入了重組質粒的大腸桿菌，應在篩選平板培養基中添加_____，平板上長出的菌落，常用 PCR 鑒定，所用的引物組成為圖2中_____。

(3)若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為 _____，對于該部位，這兩種酶_____(填“都能”“都不能”或“只有一種能”)切開。

Answer 1

【答案】 BclⅠ和HindⅢ (DNA)連接 四環素 引物甲和引物丙 都不能

【解析】本題以圖文結合的形式綜合考查學生對基因工程等知識的識記和理解能力，涉及到的知識有限制酶的作用、基因表達載體的構建、目的基因的檢測與鑒定。

(1) 圖中信息顯示：質粒的四環素抗性基因和氨芐青霉素抗性基因中都存在BamHⅠ的酶切位點，因此不能選擇BamHⅠ進行酶切；目的基因的兩端和載體上都有BelⅠ和HindⅢ的酶切位點，可見，用圖中質粒和目的基因構建重組質粒時，應選用BelⅠ和HindⅢ兩種限制酶切割。酶切后的載體和目的基因片段，再用DNA連接酶進行連接。

(2) 因構建重組質粒時，目的基因的插入破壞了氨芐青霉素抗性基因，但四環素抗性基因卻保持其結構的完整性，所以轉入了重組質粒的大腸桿菌可在添加了四環素的培養基表面長出菌落。PCR技術要求兩種引物分別和目的基因的兩條單鏈結合，沿相反的方向合成子鏈，因此若用PCR鑒定圖2中的目的基因，所用的引物組成為引物甲和引物丙。

(3) 根據表格分析可知，經BamHⅠ酶切割后產生的黏性末端為，經BclⅠ酶切割后產生的的黏性末端為，即這兩種酶切割后產生的片段具有相同的黏性末端。若BamHⅠ酶切的DNA末端與BclⅠ酶切的DNA末端連接，連接部位的6個堿基對序列為 ()，這兩種酶都不能識別該部位，因此都不能將該部位切開。