Question

【題目】如圖為某種質粒，小箭頭所指為限制性內切酶EcoRⅠ的酶切位點，ampR為氨芐青霉素抗性基因，tetR為四環素抗性基因，P為啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩端包括EcoRⅠ在內的多種酶的酶切位點。請根據圖

回答下列問題。

（1）將含有目的基因的DNA與質粒分別用EcoRⅠ酶切，酶切產物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產物有_________、_________、_________三種。將此三種連接產物與無任何抗藥性的細菌A接種到含四環素的培養基中，能生長的細菌A所含有的連接產物是_________；若接種到含青霉素的培養基中，能生長繁殖的細菌A所含有的連接產物是_________。

（2）假設人的生長激素基因，與上述質粒構建表達載體后導入細菌B（本身不含有氨芐青霉素和四環素抗性質粒），然后接種在一個只含有氨芐青霉素的培養基上，得到如圖a所示的結果（圓點表示菌落），該結果說明能夠生長的細菌中已經導入了_________，反之則沒有導入；再將滅菌絨布按到培養基a上，使絨布表面沾上菌落，然后將絨布按到只含有四環素的培養基上培養，得到如圖b所示結果（空心圓圈表示與圖a中培養基上對照沒有菌落的位置）。與圖b圓圈相對應的圖a中的菌落表現型是_________，這些菌落則是導入了_________的工程菌。

Answer 1

【答案】 目的基因和質粒連接物 質粒和質粒連接物 目的基因和目的基因連接物 質粒和質粒連接物 目的基因和質粒連接物、質粒和質粒連接物 重組質粒或普通質粒 抗氨芐青霉素而不抗四環素 重組質粒

【解析】試題分析：根據題干信息和圖像分析可知，圖中質粒上含有限制性內切酶EcoRI酶切位點、氨芐青霉素抗性基因、四環素抗性基因、啟動子、終止子、復制原點，其中兩個抗性基因一般用于篩選重組質粒，并且當限制酶切割質粒時，四環素抗性基因被破壞，即失活，因此在篩選時應選擇含有氨芐青霉素抗性基因而四環素抗性基因被破壞的重組質粒。

（1）用EcoRI酶切出的目的基因和質粒具有相同的黏性末端，如果放在一起加入DNA連接酶，則可出現3種連接結果，即目的基因自身連接形成的連接物，質粒自身連接形成的連接物和重組質粒（目的基因和質粒連接物）。將此三種連接產物與無任何抗藥性的細菌A接種到含四環素的培養基中，由于構建基因表達載體時，四環素抗性基因被破壞，因此能生長的細菌A所含有的連接產物是質粒與質粒的連接物；若接種到含青霉素的培養基中，由于青霉素抗性基因沒有被破壞，因此能生長的細菌A所含有的連接產物是目的基因與質粒的連接物、質粒與質粒的連接物。

（2）由于質粒上有2個標記基因，但抗四環素基因被插入的基因破壞掉，因此剩下的是抗氨芐青霉素抗性基因，如果在含氨芐青霉素的培養基上能生長，說明已經導入了重組質粒或普通質粒，因為普通質粒和重組質粒都含有抗氨芐青霉素的基因。與圖b空圈相對應的圖a中的菌落表現型是抗氨芐青霉素但不抗四環素，說明這些細菌中導入了重組質粒。