Question

【題目】2008年諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予了三位在研究綠色熒光蛋白（GFP）方面做出突出貢獻(xiàn)的科學(xué)家．綠色熒光蛋白能在藍(lán)光或紫外光的激發(fā)下發(fā)出熒光，這樣借助GFP發(fā)出的熒光就可以跟蹤蛋白質(zhì)在細(xì)胞內(nèi)部的移動(dòng)情況，幫助推斷蛋白質(zhì)的功能．下圖為我國(guó)首例綠色熒光蛋白（GFP）轉(zhuǎn)基因克隆豬的培育過(guò)程示意圖，據(jù)圖回答：

（1）以上培育過(guò)程中應(yīng)用到的生物技術(shù)有 ． （任選兩個(gè)）
（2）目前科學(xué)家們通過(guò)蛋白質(zhì)工程制造出了藍(lán)色熒光蛋白，黃色熒光蛋白等，采用蛋白質(zhì)工程技術(shù)制造出藍(lán)色熒光蛋白過(guò)程的正確順序是：（用數(shù)字表示）．
①推測(cè)藍(lán)色熒光蛋白的氨基酸序列和基因的核苷酸②藍(lán)色熒光蛋白的功能分析和結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)序列③藍(lán)色熒光蛋白基因的修飾（合成）④表達(dá)出藍(lán)色熒光蛋白．
（3）使用培養(yǎng)基進(jìn)行胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常要加入等天然成分．
（4）圖中通過(guò)過(guò)程①、②形成重組質(zhì)粒，需要限制性內(nèi)切酶切取目的基因、切割質(zhì)粒．限制性內(nèi)切酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是﹣G↓GATCC﹣，限制性內(nèi)切酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是﹣↓GATC﹣．在質(zhì)粒上有酶Ⅰ的一個(gè)切點(diǎn)，在目的基因的兩側(cè)各有1個(gè)酶Ⅱ的切點(diǎn)．①請(qǐng)畫出質(zhì)粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端 ． 在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能連接起來(lái)，理由是： ．

Answer 1

【答案】
（1）基因工程、核移植、早期胚胎培養(yǎng)、胚胎移植任選兩個(gè)
（2）②①③④
（3）血清
（4）；兩個(gè)不同的限制酶切割產(chǎn)生的黏性末端互補(bǔ)（答“相同且互補(bǔ)”也給分）
【解析】解：（1.）上述過(guò)程中，首先導(dǎo)入目的基因的豬的成纖維細(xì)胞要經(jīng)過(guò)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)篩選出轉(zhuǎn)基因體細(xì)胞，然后該細(xì)胞與豬的卵細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞核移植獲得重組細(xì)胞，重組細(xì)胞經(jīng)過(guò)早期胚胎培養(yǎng)到桑葚胚或囊胚期，最后經(jīng)過(guò)胚胎移植技術(shù)將早期胚胎移植到代孕母豬子宮內(nèi)，最后生成熒光克隆豬．其中涉及到的現(xiàn)代生物技術(shù)主要有基因工程、早期胚胎培養(yǎng)、細(xì)胞核移植、胚胎移植等．
（2.）蛋白質(zhì)工程的基本途徑是：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)→設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)→推測(cè)應(yīng)有的氨基酸序列→找到相對(duì)應(yīng)的脫氧核苷酸序列→相應(yīng)基因的修飾改造或人工合成→相應(yīng)的表達(dá)．
（3.）使用培養(yǎng)基進(jìn)行胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，通常要加入血清等天然成分．
（4.）限制酶識(shí)別特定的核苷酸序列，并在特定的切割位點(diǎn)切割，產(chǎn)生粘性末端．限制酶Ⅰ和Ⅱ切割后產(chǎn)生的粘性末端相同，即均產(chǎn)生GATC序列，因此可以用DNA連接酶連接起來(lái)．
【考點(diǎn)精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術(shù)和基因工程的應(yīng)用的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)；植物基因工程：抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物，利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)；動(dòng)物基因工程：提高動(dòng)物生長(zhǎng)速度、改善畜產(chǎn)品品質(zhì)、用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生產(chǎn)藥物；基因治療：把正常的外源基因?qū)�入病人體內(nèi)，使該基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮作用才能正確解答此題．