Question

【題目】【選修3：現代生物科技專題】

人乳鐵蛋白是一種重要的藥用保健蛋白。下圖表示利用乳腺生物反應器生產人乳鐵蛋白的過程，圖中Tetr表示四環素抗性基因，Ampr表示氨芐青霉素抗性基因，五種限制酶的識別序列及切割位點如表所示，請回答以下問題：

限制酶	BamHⅠ	Hae Ⅲ	BclⅠ	Sau3AⅠ	NotⅠ
識別序列 及切割位點

（1）①過程常采用的方法是_____________________________。

（2）構建基因表達載體時，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動子和__________________ 之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細胞中表達。

（3）要將人乳鐵蛋白基因插入質粒，若只允許使用一種限制酶，應選擇的限制酶是___________。

（4）據圖分析，篩選含有重組質粒的受體細胞首先需要在含________________ （填“四環素”或“氨芐青霉素”或“四環素或氨芐青霉素”）的培養基上進行，原因是_____________。

（5）若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為__________________________，對于該部位，這兩種酶_____________________（“都不能”或“只有一種能”）切開。

Answer 1

【答案】顯微注射法終止子Sau3AⅠ氨芐青霉素用限制酶切割后破壞了Tetr基因，但不會破壞Ampr基因，導入重組質粒的受體細胞（對氨芐青霉素具有抗性），能在含氨芐青霉素的培養基上生存下來都不能

【解析】

試題分析：分析題圖：圖1是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應器的過程，該過程采用了基因工程技術（目的基因的獲取、基因表達載體的構建、將目的基因導入受體細胞、目的基因的檢測與表達）、動物細胞培養技術和胚胎移植技術，圖中①表示將目的基因導入受體細胞；②表示早期胚胎培養；③表示胚胎移植；④表示此時轉基因牛；⑤表示從轉基因牛中獲取目的基因產物。

（1）將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法。

（2）構建基因表達載體時，需要將人乳鐵蛋白基因嵌入到啟動子和終止子之間，這樣人乳鐵蛋白基因就能在乳腺細胞中表達。

（3）根據表中五種酶的識別序列及切割位點可知，限制酶Sau3AI還可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將人乳蛋白基因插入載體，在只允許用一種限制酶酶切載體和人乳鐵蛋白基因的情況下，應選擇限制酶Sau3AI。

（4）據用限制酶Sau3AI切割后會破壞四環素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此倒入重組質粒的受體細胞可能在含有氨芐青霉素的培養基上生存下來。

（5）根據表格中各種限制酶的識別序列和切割位點可知，若BamH I酶切的DNA末端與Bcl I酶切的DNA末端連接起來，連接部位的6個堿基對序列為 ，對于該部位，這兩種酶都不能切開。