Question

【題目】研究表明，HER2/neu是一種原癌基因，它表達的H蛋白在多種惡性腫瘤特別是乳腺癌細胞中過量表達。抗H蛋白單克隆抗體能抑制過量表達H蛋白的乳腺癌細胞的生長，目前已成為有效的生物治療手段。

（1）選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點，是因為H蛋白在成年個體的正常組織中_____（填“低表達”或“高表達”）。H蛋白是一個跨膜蛋白，結構如圖所示。制備免疫小鼠用的H蛋白（抗原）時，應構建____________區基因，轉入原核細胞表達并提純。

（2）將H蛋白注射到小鼠體內，取該小鼠的脾臟細胞與______________細胞進行融合，使用的化學誘導劑是_____________，細胞融合的原理是______________________。

（3）將融合細胞在_________________培養基中培養，一段時間后培養基中只有雜交瘤細胞生長。將雜交瘤細胞轉到多孔培養板上培養，吸取有克隆生長的細胞培養液中的__________（填“上清液”或“沉淀細胞”），應用_____________技術進行抗體陽性檢測。經多次篩選，就能得到產生單克隆抗體的雜交瘤細胞。

（4）將篩選得到的雜交瘤細胞，經過______________或小鼠腹腔內培養，獲取大量的單克隆抗體。

（5）治療乳腺癌時，可單獨使用抗H蛋白單克隆抗體，也可將該單克隆抗體與抗癌藥物結合構建“生物導彈”，殺死癌細胞。這充分體現了單克隆抗體____________的特點。

Answer 1

【答案】（1）低表達 胞外

（2）骨髓瘤 PEG（或聚乙二醇） 細胞膜的流動性

（3）選擇 上清液 抗原—抗體雜交

（4）體外（培養）

（5）特異性強（或識別抗原部位專一）

【解析】

試題分析：（1）H蛋白在成年個體的正常組織中低表達，選擇H蛋白作為單克隆抗體的作用靶點，既能抑制癌細胞生長，又對正常組織細胞影響較小。由于H蛋白是一個跨膜蛋白，只要選擇胞外區的基因進行構建，轉入原核細胞表達并提純即可獲得相應抗原。

（2）取經H蛋白處理的小鼠脾臟細胞與骨髓瘤細胞進行融合，化學誘導劑通常使用PEG，細胞融合的原理是細胞膜的流動性。

（3）融合細胞需要用選擇培養基篩選出既能分泌抗體又能無限增殖的雜交瘤細胞。利用抗原—抗體雜交技術來確定克隆生長的細胞培養孔中的上清液中是否含有相應的抗體。

（4）培養雜交瘤細胞的方法有體外培養和小鼠腹腔內培養。

（5）單克隆抗體具有特異性強的特點