Question

【題目】內皮素（ET）自1988年發現以來，一直是人們研究的熱點。它不僅存在于血管內皮，也廣泛存在于各種組織和細胞中，是調節心血管功能的重要因子，對維持基礎血管張力與心血管系統穩態有重要作用。內皮素主要通過與靶細胞膜上的內皮素受體結合而發揮生物學效應。ETA是內皮素的主要受體，科研人員試圖通過構建表達載體，實現ETA基因在細胞中高效的表達，其過程如圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識別序列為，限制酶XhoⅠ的識別序列為。請據圖分析并回答下列問題：

（1）進行過程①時，需要加入緩沖液、引物、dNTP和 酶等。完成過程①②③的目的是 。

（2）過程③和⑤中，限制酶XhoI切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是 。用兩種限制酶切割獲得不同的黏性末端，其主要目的是 。

（3）構建的重組表達載體，目的基因上游的啟動子的作用是 ，除圖示結構外，完整的基因表達載體還應具有 等結構（至少寫出兩個結構）。

（4）過程⑥要CaCl2預先處理大腸桿菌，使其成為容易吸收外界DNA的 細胞。

（5）利用SNAP基因與ETA基因結合構成融合基因，目的是 。

（6）人皮膚黑色素細胞上有內皮素的特異受體,內皮素與黑色素細胞膜上的受體結合后,會刺激黑色素細胞的分化、增殖并激活酪氨酸酶的活性,從而使黑色素急劇增加。美容時可以利用注射ETA達到美白祛斑效果，試解釋原因： 。

Answer 1

【答案】

（1）反轉錄（逆轉錄） 獲取目的基因（ETA基因）

（2） 使目的基因定向連接到載體上，以防止目的基因自身環化

（3）RNA聚合酶識別和結合的部位，驅動基因的轉錄 復制原點、終止子

（4）感受態

（5）檢測ETA基因能否表達及表達量

（6）ETA能與內皮素結合,減少了內皮素與黑色素細胞膜上內皮素受體的結合,抑制了內皮素對黑色素細胞的增殖和黑色素的形成

【解析】