Question

【題目】為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉運肽基因相連，導入油菜細胞并獲得了轉基因油菜品種．請回答下列問題：
（1）研究人員從陸地棉中獲取酶D基因，并用同樣的方法獲取轉運肽基因．依據基因的已知序列設計引物，然后采用分別進行擴增．
（2）如圖所示，選用圖中的酶處理兩個基因后，再用DNA連接酶處理，可得到端（填圖中字母）相連的融合基因．
（3）將上述融合基因插入圖所示Ti質粒的T﹣DNA中，構建并導入農桿菌中．將獲得的農桿菌接種在含的固體平板上培養得到含融合基因的單菌落，再利用液體培養基震蕩培養，可以得到用于轉化的侵染液．
（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是 ， 進一步篩選后獲得轉基因油菜細胞，該細胞通過植物組織培養技術，可培育成轉基因油菜植株．
（5）用抗原﹣抗體雜交法可檢測轉基因油菜植株中的融合基因是否 ．

Answer 1

【答案】
（1）基因文庫； PCR技術
（2）ClaⅠ； AD
（3）基因表達載體（或“重組質粒”）；四環素
（4）利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞
（5）成功表達
【解析】解：（1）獲取目的基因的方法包括：①從基因文庫中獲取；②利用PCR技術擴增； ③人工合成（化學合成）．因此，可以從基因文庫中獲取酶D基因和轉運肽基因；擴增目的基因可采用PCR技術．（2）切割獲得酶D基因和轉基因肽基因時，應該用同種限制酶，以獲得相應的黏性末端．因此，可用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．（3）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質粒的T﹣DNA中，構建表達載體并導入農桿菌中．由圖可知，標記基因是四環素抗性基因，因此將獲得的農桿菌接種在含四環素的固體平板上培養得到單菌落．（4）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞．（4）檢測目的基因是否成功表達，應該采用抗原﹣抗體雜交法．

所以答案是：（1）基因文庫；PCR技術（2）ClaⅠA；D（3）基因表達載體（或“重組質粒”）；四環素（4）利用農桿菌將融合基因導入油菜細胞（5）成功表達

【考點精析】利用基因工程的原理及技術對題目進行判斷即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重組技術．