Question

【題目】圖（a）中的三個DNA片段上以此表示出了EcoRI、BamHI和Sau3AI三種限制性內切酶的識別序列與切割位點，圖（b）為某種表達載體示意圖（載體上的EcoRI、Sau3AI的切點是唯一的）。

根據基因工程的有關知識，回答下列問題：

（1）經BamHI酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被____________酶切后的產物連接，理由是____________。

（2）若某人利用圖（b）所示的表達載體獲得了甲、乙、丙三種含有目的基因的重組子，如圖（c）所示。這三種重組子中，不能在宿主細胞中表達目的基因產物的是___________，不能表達的原因是____________。

（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有____________和____________，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是____________。

Answer 1

【答案】（1）Sau3AⅠ 兩種酶切割后產生的片段具有相同的黏性末端

（2）甲和丙 甲中目的基因插入在啟動子的上游，丙中目的基因插入在終止子的下游，二者的目的基因均不能被轉錄

（3）E．coliDNA連接酶 T4DNA連接酶 T4DNA連接酶

【解析】（1）分析圖解可知，限制酶Sau3AI和BamHI酶切割后形成的黏性末端相同，因此經BamHI酶切割得到的目的基因可以與上述表達載體被Sau3AI酶切后的產物連接。

（2）在基因表達載體中，啟動子位于目的基因的首端，終止子應位于目的基因的尾端，這樣的基因才能表達。圖中甲和丙均不符合，所以不能在宿主細胞中表達目的基因產物。

（3）DNA連接酶是將兩個DNA片段連接起來的酶，常見的有E·coliDNA連接酶和T4DNA連接酶，其中既能連接黏性末端又能連接平末端的是T4DNA連接酶。