Question

【題目】回答有關生物技術的問題． Ⅰ、抗體的制備經歷了細胞學層面和分子學層面兩種合成途徑的研究．下列是生物學技術制備抗體的兩個途徑模式簡圖．

Ⅱ、上圖中，結構甲的建構可用圖1和2表示．圖1表示含有目的基因的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質粒的結構和部分堿基序列．現有4種限制性核酸內切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點分別為如表所示．

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
識別序列及切割位點

（1）在獲取抗體之前，需要向健康人體注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重復注射一次．免疫學稱細胞A為 ， 該細胞在人體主要介導免疫．
（2）過程①至②抗體的獲取稱為 ， 其中①是過程，Y細胞稱為 ．
（3）若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，其產物長度為 ．
（4）若圖1中虛線方框內的堿基對被T﹣A堿基對替換，那么基因D就突變為基因d．從雜合子中分離出圖1及對應的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產物中共有種不同長度的DNA片段．
（5）上述結構中的建構過程可知，在限制酶作用下得到的產物有多種，生產上多采用技術來降低目的基因分離提取的難度，也有利于限制酶的回收和再利用．
（6）若將圖2中質粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進行拼接，形成重組質粒，那么應選用的限制酶是 ． 在導入重組質粒后，為了篩選出含有重組質粒的大腸桿菌，一般需要添加的（固體/液體）培養基進行培養．在培養前，培養基必須先經過滅菌，所用的方法是；采用的方法接種以獲得單菌落后繼續篩選．

Answer 1

【答案】
（1）漿細胞（效應B淋巴細胞）；體液
（2）單克隆抗體；細胞融合；雜交瘤細胞
（3）537，790，661
（4）4
（5）酶的固定化
（6）BamHⅠ；抗生素B；固體；高壓滅菌；劃線（或涂布）
【解析】解：（1）向健康人體注射特定抗原，提取出A漿細胞（效應B淋巴細胞），在人體參與體液免疫．（2）過程①至②抗體的獲取稱為單克隆抗體，其中①是細胞融合過程，Y細胞稱為雜交瘤細胞．（3）SmaⅠ識別的序列為GGGCCC，切割會產生平末端；圖1中DNA片段含有兩個SmaⅠ識別位點，第一個識別位點在左端534 bp序列向右三個堿基對的位置；第二個識別位點在右端658bp序列向左三個堿基的位置，從而兩個位點切割后產生的DNA片段的長度分布為534+3，796﹣3﹣3，658+3，即得到的DNA片段長度為537、790、661．（4）在雜合子體內含有基因D和基因d，基因D的序列中含有兩個識別位點，經過SmaI完全切割會產生537bp、790bp和661bp三種不同長度的片段，基因d的序列中含有一個識別位點，經過切割后會產生1327bp和661bp兩種長度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNA片段經過切割后會產生4種不同長度的片段．（5）固定化酶的優點：①既能與反應物接觸，又能與產物分離；②可以反復利用．（6）能夠獲取目的基因并切開質粒的限制酶有識別序列為GGATCC的BamH I和識別序列為GATC的MboI，若使用Mbo I會同時破壞質粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I來切割目的基因和質粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質粒的大腸桿菌．因為目的基因和運載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質粒切割后的兩個末端都能進行互補，可能出現目的基因反向連接在運載體上的情況，導致基因D不能正確表達．在培養前，培養基常用高壓滅菌滅菌；采用劃線（或涂布）的方法接種以獲得單菌落后繼續篩選． 所以答案是：（1）漿細胞（效應B淋巴細胞） 體液（2）單克隆抗體 細胞融合 雜交瘤細胞（3）537，790，661（4）4（5）酶的固定化（6）BamHⅠ 抗生素B 固體 高壓滅菌 劃線（或涂布）
【考點精析】根據題目的已知條件，利用基因工程的原理及技術和單克隆抗體的制備的相關知識可以得到問題的答案，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術；對免疫小鼠注射特定的抗原蛋白；提取B淋巴細胞；同時用動物細胞培養的方法培養骨髓瘤細胞并提取；促使它們細胞融合；在特定的選擇培養基上篩選出融合的雜種細胞；然后對它進行克隆化培養和抗體檢測；最后將雜交瘤細胞在體外做大規模培養或注射入小鼠腹腔內增殖，從細胞培養液或小鼠腹水中可得到大量的單克隆抗體．