Question

【題目】復(fù)合型免疫缺乏癥患者由于缺少腺苷酸脫氨酶基因（ada基因）而導(dǎo)致免疫功能 缺損�？茖W(xué)家將正常人的ada基因轉(zhuǎn)人患者的T細(xì)胞中，再將攜帶ada基因的T細(xì)胞 注入患者體內(nèi)，可以改善患者的免疫功能�；卮鹣铝袉�(wèn)題：

（1）從正常人的T細(xì)胞中獲取總RNA，在___________酶的作用下合成cDNA，在cDNA 中還需要篩選才能獲得ada基因，其原因是___________。

（2）根據(jù)ada基因兩端的核苷酸序列合成___________，并通過(guò)___________技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行篩選和擴(kuò)增。在擴(kuò)增過(guò)程中首先要進(jìn)行90-95℃保溫，其目的是___________。

（3）上述治療方法屬于___________（填“體內(nèi)基因治療”或“體外基因治療”），將人正常的ada基因?qū)�人到患者�?/span>T細(xì)胞時(shí)，需要構(gòu)建基因表達(dá)載體，其目的是___________。

Answer 1

【答案】逆轉(zhuǎn)錄 T細(xì)胞中有多種基因進(jìn)行表達(dá) 引物 PCR 使DNA解旋 體外基因治療 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用

【解析】

1、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因—DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA—分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)—抗原-抗體雜交技術(shù)。個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。
2、基因治療的種類(lèi)：體外基因治療和體內(nèi)基因治療（注意兩者的區(qū)別），其中效果比較可靠的是體外基因治療。
（1）體外基因治療：先從病人體內(nèi)獲得某種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，然后再體外完成轉(zhuǎn)移，再篩選成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞增植培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內(nèi)，如腺苷酸脫氨酶基因的轉(zhuǎn)移。
（2）體內(nèi)基因治療：用基因工程的方法直接向人體組織細(xì)胞中轉(zhuǎn)移基因的方法。

（1）以RNA為模板合成DNA的過(guò)程為逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，需要逆轉(zhuǎn)錄酶的催化；T細(xì)胞中有多種基因進(jìn)行表達(dá)，如ada基因，因此T細(xì)胞中的總RNA逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA中含有ada。
（2）根據(jù)ada基因兩端的核苷酸序列合成引物，并通過(guò)PCR技術(shù)對(duì)目的基因進(jìn)行篩選和擴(kuò)增。在擴(kuò)增過(guò)程中首先要進(jìn)行90～95℃保溫，其目的是使DNA解旋。
（3）先從病人體內(nèi)獲得某種細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，然后再體外完成轉(zhuǎn)移，再篩選成功轉(zhuǎn)移的細(xì)胞增植培養(yǎng)，最后重新輸入患者體內(nèi)，這屬于體外基因治療。構(gòu)建基因表達(dá)載體的目的是使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給下一代，同時(shí)，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用。