Question

【題目】北極比目魚中有抗凍基因，下圖是獲取轉基因抗凍番茄植株的過程示意圖，請回答：

（1）利用過程①的方法構建的基因文庫稱為__________。與真核基因相比，其結構中不含______序列。

（2）為使過程①獲取的目的基因在番茄細胞中能夠表達，在構建表達載體時，需在目的基因的兩端加入__________，確認抗凍基因是否正確表達，應檢測植株中__________是否呈陽性。

（3）將重組質粒導入農桿菌，并通過農桿菌的轉化作用，可以將目的基因導入番茄體細胞中染色體的DNA上，其原理是________________。

（4）發現一種抗凍能力很強的細菌（Ac菌），通過細胞融合技術構建雜種抗凍體系的植株過程中能否只用一種酶分離原生質體？___________，理由是_________________。

Answer 1

【答案】部分基因文庫（或cDNA文庫）內含子啟動子、終止子 表達產物（或抗凍蛋白）目的基因隨農桿菌中Ti質粒上的T-DNA轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體DNA上不能，兩者細胞壁成分不同（前者細胞壁成分為肽聚糖，后者為纖維素及果膠）

【解析】

分析題圖，圖中①表示反轉錄法獲取目的基因的過程；②表示基因表達載體的構建過程，是基因工程的核心步驟；之后采用農桿菌轉化法，將目的基因導入番茄組織塊；最后采用植物組織培養技術，將導入目的基因的番茄組織細胞培養成抗凍番茄植株。

（1）圖中①表示反轉錄法獲取目的基因的過程，該方法構建的基因文庫為部分基因文庫（或cDNA文庫）；真核基因轉錄形成的成熟的mRNA是不包括內含子對應的片段的，因此該方法獲得的目的基因與真核基因相比，其結構中不包含內含子序列。

（2）啟動子和終止子分別具有啟動基因轉錄和終止轉錄的功能，因此在在構建表達載體時，需在目的基因的兩端加入啟動子、終止子，才能使得目的基因可能在番茄細胞中表達；檢測抗凍基因是否正確表達，應檢測植株中表達產物（或抗凍蛋白）是否呈陽性。

（3）利用農桿菌轉化法將重組質粒導入番茄體細胞中染色體的DNA上的原理是：目的基因隨農桿菌中Ti質粒上的T-DNA轉移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體DNA上。

（4）細菌的細胞壁的主要成分是肽聚糖，植物細胞壁的主要成分是纖維素和果膠，因此只用一種酶不能獲得兩種細胞的原生質體。