Question

【題目】水中細菌總數可以作為判定被檢水樣被有機物污染程度的標志。在水質衛生學檢驗中，細菌總數是指1mL水樣在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基中，經37℃、24h培養后，所生長出的菌菌落數。為初步測定某處池水中的細菌數目，實驗的大致流程為：

回答下列問題：

（1）對采集的池水進行梯度稀釋時，應先將1mL水樣加入___________中以獲得稀釋10倍的稀釋液。實驗中對采集的池水要進行稀釋的原因是___________________________。

（2）接種培養所用到培養基中，能為細菌同時提供碳源和氮源的物質是_________________________。

（3）為保證菌落計數結果準確，一般選擇菌落數在__________的平板進行計數。用這種方法統計的菌落數目往往比活菌的實際數目低，原因是____________________________。

（4）實驗過程中為確保培養基上菌落來自所采集水樣，避免雜菌污染。實驗中需要注意的具體操作有____________________________（至少答2點）。

Answer 1

【答案】 9ml無菌水 避免池水中細菌數目過多（密度過大），得不到單菌落 牛肉膏、蛋白胨 30—300 當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落 采集水樣的容器要滅菌，稀釋和接種要在酒精燈火焰旁等

【解析】試題分析：題中只需要水中的細菌數目，不需要進行鑒定，微生物培養中，對活菌計數常用稀釋涂布平板法，除此之外計數方法還有顯微鏡直接計數法。

（1）對池水進行稀釋時，為了減少誤差，所用必須為無菌水，1ml水樣稀釋10倍，則加9ml無菌水；池水中細菌數目過多，在進行涂布培養時不容易獲得單個菌落，使計數誤差較大。

（2）稀釋后的水樣接種在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基中培養，牛肉膏、蛋白胨均含有蛋白質、糖類等有機物，故其能為細菌同時提供碳源和氮源的物質是牛肉膏、蛋白胨。

（3）為保證菌落計數結果準確，一般選擇菌落數在30—300的平板進行計數。稀釋涂布平板法計數一般都會偏低，原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。

（4）為避免雜菌污染，必須嚴格按照無菌技術，實驗者、操作臺消毒處理；所用容器均需滅菌；整個實驗過程需要在酒精燈火焰旁進行等。