Question

【題目】（六）回答下列有關(guān)遺傳信息傳遞與表達(dá)的問題。

利用大腸桿菌作為工程菌生產(chǎn)人胰島素，圖甲中的三個(gè)DNA片段上以此表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三種限制性內(nèi)切酶的識(shí)別序列與切割位點(diǎn)，圖乙為某種表達(dá)載體示意圖（載體上的EcoR I、Sau3A I的切點(diǎn)是唯一的）。

【1】質(zhì)粒載體作為基因工程的工具，應(yīng)具備的基本條件有_______________________。

【2】可以從下列哪些人體細(xì)胞中獲取生產(chǎn)人胰島素的目的基因 （多選題）。

A. 消化道黏膜上皮細(xì)胞 B. 胰島A細(xì)胞

C. 胰島B細(xì)胞 D. 造血干細(xì)胞

【3】經(jīng)BamH I酶切割得到的目的基因可以與圖乙所示質(zhì)粒被_____________酶切后的產(chǎn)物連接，理由是_______________。連接后的重組質(zhì)粒_____（能、不能、不一定）被BamH I切割。

【4】將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到大腸桿菌受體細(xì)胞，可用含有___________的培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選。目的基因成功表達(dá)的標(biāo)志是________________。

【5】已知圖乙所示質(zhì)粒經(jīng)EcoRI和Sau3AI聯(lián)合酶切后形成2.0 kb和4.2 kb（1 kb = 1000對(duì)堿基）兩種DNA片段，若將0.8 kb的單個(gè)基因插在質(zhì)粒的Sau3AI位點(diǎn)處，所形成的重組質(zhì)粒用EcoRI和Sau3AI聯(lián)合酶切后，能形成的DNA片段分別為 。

A. 2.8 2.0 2.2 B. 1.8 2.0 2.2

C. 4.0 1.8 1.0 D. 2.0 0.8 4.2

Answer 1

【答案】

【1】能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、能啟動(dòng)外源目的基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯、含有多個(gè)酶切位點(diǎn)

【2】ABCD

【3】Sau3AⅠ限制酶Sau3AⅠ與BamHⅠ切割后形成的黏性末端相同不一定

【4】四環(huán)素合成胰島素

【5】D

【解析】據(jù)圖分析，圖甲中三種限制酶的識(shí)別和切割位點(diǎn)不同，但是BamH I和Sau3A I漏出的粘性末端相同，可以用DNA連接酶連接；圖乙質(zhì)粒上含有啟動(dòng)子、終止子、復(fù)制原點(diǎn)、標(biāo)記基因（四環(huán)素抗性基因）、EcoR I和Sau3A I兩種限制酶的切割位點(diǎn)。

【1】質(zhì)粒作為運(yùn)載體，應(yīng)具備的基本條件有：能自我復(fù)制、具有標(biāo)記基因、能啟動(dòng)外源目的基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯、含有多個(gè)酶切位點(diǎn)等。

【2】消化道黏膜上皮細(xì)胞、胰島A細(xì)胞、胰島B細(xì)胞、造血干細(xì)胞都是由受精卵增殖分化而來的，遺傳物質(zhì)不變，都可以提取到人胰島素基因，故選ABCD。

【3】分析圖解可知，限制酶Sau3AI和BamHI酶切割后形成的黏性末端相同，因此經(jīng)BamHI酶切割得到的目的基因可以與上述表達(dá)載體被Sau3AI酶切后的產(chǎn)物連接；BamHI酶識(shí)別的序列為GGATCC，Sau3AⅠ限制酶識(shí)別的序列為GATC，因此連接后的重組質(zhì)粒不一定被BamHI切割。

【4】重組質(zhì)粒中含有四環(huán)素抗性基因，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到大腸桿菌受體細(xì)胞，可用含有四環(huán)素的培養(yǎng)基進(jìn)行初步篩選。目的基因是胰島素基因，胰島素基因成功表達(dá)的標(biāo)志是合成胰島素。

【5】若將0.8kb的單個(gè)基因插在質(zhì)粒的Sau3AI位點(diǎn)處，所形成的重組質(zhì)粒中含有2個(gè)Sau3AI切割位點(diǎn)和1個(gè)EcoRI切割位點(diǎn)，因此重組質(zhì)粒用EcoRI和Sau3AI聯(lián)合酶切后，能形成的DNA片段分別為4.2kb、0.8kb、2kb。