Question

【題目】下圖是利用轉基因技術生產干擾素的簡化流程。請分析回答：

（1）過程①使用的 酶能使特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的 （化學鍵）斷開。運載體的黏性末端與目的基因DNA片段的黏性末端就可通過 __而結合。過程②需要用到 酶。

（2）A上應有RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動干擾素基因轉錄，該部位稱為 。為直接檢測干擾素基因是否轉錄，可從細胞中提取 __與用放射性同位素標記的____________作探針進行分子雜交，。

（3）利用PCR擴增儀大量擴增目的基因的前提是目的基因的核苷酸序列要有一段是已知的，以便根據這一序列合成 ，除了該物質和目的基因外，擴增儀中還需加入四種脫氧核苷酸和 酶，并適時調整溫度，才能使目的基因數量成指數式增長。

（4）在該工程中所用的基因“剪刀”能識別的序列和切點是—G′GATCC—。

請畫出質粒被切割形成黏性末端的過程圖

Answer 1

【答案】（1）（同一種）限制性核酸內切酶（限制酶）； 磷酸二酯鍵； 堿基互補原則 ； DNA連接酶．

（2）啟動子 mRNA 目的基因

（3）引物 熱穩定DNA聚合酶（Taq酶）

（4）—G′GATCC— —G GATCC— —C CTAGG— —CCTAG G—

【解析】

試題分析：（1）過程（1）是獲取目的基因，需用限制性核酸內切酶把特定部位的兩個脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵分開，然后運載體的黏性末端與目的基因DNA片段的黏性末端通過堿基互補配對原則連接，DNA連接酶連接磷酸二酯鍵。

（2）啟動子的作用是：RNA聚合酶識別和結合的部位，以驅動基因轉錄。檢測干擾素基因是否轉錄用分子雜交，即用放射性同位素標記的目的基因與從細胞中提取的mRNA雜交。

（3）PCR技術的條件是：一段是已知的核苷酸序列即引物、熱穩定DNA聚合酶、四種脫氧核苷酸、目的基因。

（4）基因“剪刀”會切出兩個粘性末端，而且互補。